Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

IV. Diskussion
Hemmer et al. (1999) zeigt jedoch am Beispiel der Lyme disease, dass die Methode für einige
TZR durchaus zum Erfolg führen kann.
Abschließend kann man sagen, dass die Methode der PS-CPL für unseren TZR in der
durchgeführten Art und Weise nicht zu einem aussagekräftigen Ergebnis geführt hat. Es konnte
nicht eindeutig geklärt werden, ob die schwachen Signale auf die zu geringe Degeneriertheit
der untersuchten TZR oder auf die zu geringe Sensitivität der Analysemethode zurückzuführen
sind.
Ausblick
Wir konnten an zwei Beispielen zeigen, dass die Identifikation und Expression gepaarter TZR
α- und β-Ketten pathogener T-Zellen aus Muskelbiopsien von Myositispatienten möglich war.
Im nächsten Schritt sollte dies auch in dem bereits beschriebenen MS-Patienten FE erreicht
werden. Außerdem könnten weitere Gewebeproben von MS-Patienten analysiert werden. Da
es schwierig ist, Biopsiematerial von MS-Patienten zu bekommen, kann man auf
Autopsiematerial zurückgreifen, das vor der Analyse auf seine Qualität getestet wurde. Die
Methode ist generell für die Analyse aller T-Zell-vermittelten Autoimmunerkrankungen,
Infektionserkrankungen sowie tumorinfiltrierenden T-Zellen anwendbar. Gelingt es, das AG
eines detektierten TZR zu identifizieren, könnte man möglicherweise Rückschlüsse auf die
Krankheitsursache ziehen und effektivere Therapieansätze ermöglichen.
Wie bereits beschrieben erwies sich die Sensitivität des IL-2-ELISAs bei den ersten Versuchen
ein AG zu finden als zu gering. Aus diesem Grund ist es nötig die Analysemethode zu
optimieren. Es sollten Konstrukte kloniert werden, bestehend aus einem Reporter-Gen für GFP
bzw. Luciferase, die unter der Kontrolle des NFAT-Promotors stehen (Durand et al., 1988;
Verweij et al., 1990; Aarnoudse et al, 2002). NFAT steht für nuclear factor of activated T cells
und spielt eine Rolle bei der T-Zell-Aktivierung. Nach einer Aktivierung der Zelle kann die
Expression des Reportergens durch Messung der Grünfluoreszenz im Falle des GFP oder der
Lumineszenz-Messung im Falle der Luciferase sichtbar gemacht werden. Eine weitere
Möglichkeit besteht in der Verwendung von LacZ als Reportergen (Sanderson und Shastri,
1994).
Als Alternative zur hier beschriebenen Peptid-Library soll eine cDNA-Library zur
Antigensuche angewandt werden. Hierzu wird eine normalisierte Muskellibrary (Invitrogen)
durch Rekombination in einen Zielvektor eingebracht und Stocks von jeweils 20
unterschiedlichen cDNA-Fragmenten hergestellt. Diese werden dann transient in APZ
transfiziert, die das entsprechende HLA-Molekül exprimieren. Nach der Detektion eines
postitiven Stocks kann dieser so verdünnt werden, dass nur noch ein Konstrukt pro Stock
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