Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

I. Einleitung
Abb. 6 zeigt die einzelnen Schritte nochmals in einer Graphik zusammengefasst.
Schritt 1
Schritt 2
Schritt 3
Schritt 4
Schritt 5
Schritt 6
Schritt 7
Schritt 8
Identifizierung klonal expandierter TZR β-Ketten
durch CDR3-Spektratyping
Färbung von Biopsien auf korrespondierende TZR Vβ-Regionen
und Isolation der Einzelzellen durch Lasermikrodissektion
RT-Reaktion und
α- und β-Ketten Prä-Amplifikation
β-Ketten PCR
(mit klonspezifischen Primern)
α-Ketten PCR
(mit universellen Primer Sets)
Identifikation gepaarter αβ-TZR-Ketten
α-Ketten PCR
(mit klonspezifischen Primern)
Bestätigung und Identifizierung zusätzlicher αβ-Paare
Expression funktioneller αβ-TZR-Moleküle
in murinen T-Hybridomzellen
Antigensuche
nur β-positive Zellen
alle β-positiven Zellen
Abb. 6: Vorgehensweise zur Isolation und Identifizierung von αβ-TZR-Pärchen aus Gewebe
Dass Schema zeigt die einzelnen Schritte, die notwendig sind, um aus einer Gewebsbiopsie potentiell
autoaggressive T-Lymphozyten detektieren, isolieren und analysieren zu können. Nach der Detektion
expandierter TZR-β-Ketten (Schritt 1) erfolgt die Färbung und Isolation der Zellen (Schritt 2). Die Analyse
der Einzelzellen konzentriert sich nach der cDNA-Synthese und der Prä-Amplifikation (Schritt 3) zunächst
auf die β-Kette (Schritt 4).Die β-positiven Zellen werden dann auf eine gepaarte α-Kette untersucht und
bestätigt (Schritt 5 und 6). Die αβ-Paare werden dann in eine Hybridomzelllinie transfiziert und zur
Antigensuche verwendet. (verändert nach Seitz et al., 2006)
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