Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

III. Ergebnisse
Abb. 16: AP-Färbung von Vβ1 + -T-Lymphozyten auf Tonsillengewebe sowie Muskelgewebe des
Patienten PM16488
A: AP-Färbung Vβ1 + -T-Lymphozyten aus Tonsillengewebe. Die eingesetzte AK-Konzentration des anti Vβ1-
AK betrug 1:100 in 2%Ziegenserum in TBS, die des Schaf-anti-Ratte-Biotin-AK 1:100 in 2%Ziegenserum in
TBS.
B: AP-Färbung Vβ1 + -T-Lymphozyten aus Muskelgewebe. Die eingesetzte AK-Konzentration des anti Vβ1-
AK betrug 1:100 in 2%Ziegenserum in TBS, die des Schaf-anti-Ratte-Biotin-AK 1:100 in 2%Ziegenserum in
TBS.
Die potentiell autoaggressiven T-Lymphozyten sind mit einem Pfeil markiert.
Sowohl der unmarkierte Vβ1-AK als auch der biotinylierte AK wurde in einer Verdünnung
von 1:100 eingesetzt.
Die Färbung des Muskelgewebes zeigt einige Zellen, die zur Isolation geeignet sind, da sie
engen Kontakt zur Muskelfibrille aufweisen. Diese sind mit einem Pfeil markiert. Es sind auch
viele bystander-Zellen zu sehen. Durch die Lasermikrodissektion ist jedoch möglich, nur die
relevanten Zellen zu isolieren.
2.1.2 Isolierung expandierter Vβ1 + bzw. Vβ23 + Einzelzellen der
Myositispatienten
dissektion
PM16488 bzw. IBM15551 durch Lasermikro-
Nach dem AK-Test konnten wir mit der Isolation von Vβ1 + Zellen des Patienten PM16488
beginnen. Hierfür wurden Gewebeschnitte (Dicke 10µm) auf Folienobjektträger aufgebracht
und mit dem AK gegen die Vβ1-Region des TZR gefärbt. Wir verwendeten die Methode der
AP-Färbung, da zu diesem Zeitpunkt wie bereits erwähnt die Isolation von Zellen
fluoreszenzgefärbter Präparate noch nicht möglich war. Zur Isolation wurden die einzelnen
Zellen mit einem Laserstrahl aus dem Gewebe herausgeschnitten und durch einen gezielten
Laserschuss in das darüber platzierte PCR-Reaktionsgefäß katapultiert (siehe Material und
Methoden II.3.4).
Insgesamt isolierten wir 1230 Vβ1 + Einzelzellen aus dem Biopsiematerial des Patienten
PM16488. In Abb. 17 ist eine Auswahl isolierter T-Zellen dargestellt, die später in der Analyse
durch die Einzelzell-RT-PCR sowohl für die TZR-β- als auch für die TZR-α-Kette ein
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