Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

IV. Diskussion
T-Zellen erfolgte durch die Färbung mit einem Antikörper gegen die variable Region
derjenigen TZR-β-Kette, welche zuvor im CDR3-Spektratyping eine Expansion zeigte.
Sowohl das CDR3-Spektratyping als auch die Färbung mit einem Antikörper ist fast
ausschließlich auf die Analyse der TZR-β-Kette beschränkt. Durch die wesentlich höhere
genetische Variabilität der TZR-α-Kette ist es bis jetzt nicht möglich, eine Spektratyping-
Analyse für die α-Kette durchzuführen, denn den 13 verschiedenen J-Elementen der β-Kette
stehen 50 verschiedene J-Elemente der α-Kette gegenüber (Arstila et al., 1999). Auch die
Färbung der variablen Region der TZR-α-Kette ist nur eingeschränkt möglich, da lediglich drei
AK zu Verfügung stehen: Vα2.3, Vα12 und Vα24 (Janson et al., 1989; DerSimonian et al.,
1991; Padovan et al., 1993). Somit ist eine Analyse der Vα-Kette durch Färbung mit einem
AK auf die aufgeführten drei V-Regionen beschränkt. Da die α-Kette also nicht durch Färbung
oder CDR3-Spektratype detektiert werden kann, muss für die gleichzeitige Identifizierung
beider TZR-Ketten die im Rahmen dieser Arbeit etablierten Einzelzell-RT-PCR-Methode
angewandt werden. Da diese sehr anspruchsvoll ist, beschränkten sich bisherige Studien fast
ausschließlich auf die Untersuchung des β-Ketten-Repertoires (Babbe et al., 2000; Hofbauer et
al., 2003; Roers et al., 1998).
Nur in einigen Ausnahmefällen war eine Identifizierung gepaarter αβ-Ketten dennoch
möglich. Es gelang in Experimenten mit lebenden Zellen, die zuvor mit einem der wenigen
erhältlichen α-AK gefärbt wurden oder bei Zellen deren α-Kette bereits bekannt war, αβ-
Pärchen zu detektieren (Hamrouni et al., 2003; Kurokawa et al., 2001). Auch in einzelnen
Fällen, in denen eine monoklonale Expansion vorlag, konnten αβ-TZR-Pärchen identifizert
werden. Hier war es möglich ohne Berücksichtigung der Morphologie das
Gewebehomogenisat zu analysieren (Hohlfeld et al., 1991; Pluschke et al., 1992; Wiendl et al.,
2002; Dornmair et al., 2004).
Die Abgrenzung zwischen autoaggressiven T-Zellen und irrelevanten bystander-Zellen durch
den Kontakt der T-Zelle mit einer Zielzelle, konnte bei der Untersuchung des Hirngewebes des
MS-Patienten nicht angewandt werden. Im gefärbten Hirngewebe waren keine eindeutigen
durch die T-Lymphozyten angegriffenen Zielstrukturen erkennbar. Hier konnten wir nur das
Ergebnis der CDR3-Spektratyping-Analyse als Hinweis auf die Pathogenität der Zelle
verwenden.
TZR-Paare der Myositispatienten PM16488 sowie IBM15551
Die CDR3-Spektratyping-Anaylse des Polymyositispatienten PM16488 lieferte eine Vβ1-
Jβ1.2-Expansion, die des Patienten IBM15551 eine Vβ23-Jβ1.1-Expansion. Nach der Färbung
der T-Lymphozyten mit den entsprechenden AK gegen die variable Region der TZR-β-Ketten
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