Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

IV. Diskussion
IV. Diskussion
Der Hintergrund dieser Arbeit ist die Frage, weshalb die Zellen des Immunsystems bei
Patienten mit Myositis, Multipler Sklerose oder anderen Autoimmunerkrankungen in den
Muskel, das Gehirn oder in andere Zielorgane einwandern und welches Antigen sie dort
erkennen. Ein Schritt zur Beantwortung dieser Frage war, die gewebsinvasiven potentiell
autoaggressive T-Lymphozyten aus dem Zielgewebe durch Lasermikrodissektion zu isolieren
und mit einer hierfür entwickelten Einzelzell-PCR αβ-TZR-Paare zu identifizieren. Im
nächsten Schritt wurden die so erhaltenen TZR in der Hybridomzelllinie 58α - β - „wieder zum
Leben erweckt“ (Blank et al., 1993) und für erste Versuche zur Antigensuche eingesetzt.
Unterscheidung zwischen autoreaktiven T-Lymphozyten und bystander-Zellen
Bevor wir beginnen konnten, gezielt Zellen aus Gewebe zu isolieren und zu analysieren,
mussten wir zunächst herausfinden, welche T-Lymphozyten für die Analyse interessant sind.
Hierfür ist es nötig, zwischen autoaggressiven T-Zellen und so genannten bystander-Zellen
unterscheiden zu können. Man nimmt an, dass die erste Welle der Invasion aus autoantigen
spezifischen T-Zellen besteht, die im Zielgewebe expandieren. Anschließend wandern jedoch
vermehrt irrelevante bystander-Zellen ein, angelockt durch Cytokine und Chemokine
(zusammengefasst in Dornmair et al., 2003). Da die Diagnose der Krankheit und somit die
Entnahme der Biopsie meist längere Zeit nach Ausbruch der Krankheit erfolgt, sind sowohl
Effektor-T-Zellen sowie bystander-Zellen in der Biopsie enthalten. Aus diesem Grund müssen
die isolierten T-Zellen zwei Kriterien erfüllen. Zum einen muss die TZR-β-Kette der Zelle
klonal expandiert sein, zum anderen muss die Zelle im engen Kontakt mit der Zielzelle stehen.
Die klonale Expansion einer β-Kette detektierten wir mittels CDR3-Spektratyping-Analyse
(zusammengefasst in Pannetier et al., 1995). Das zweite Kriterium, die Lage der Zelle im
Gewebe, ist bei einer Muskelbiopsie eines Myositispatienten sehr aussagekräftig. Bei der
Myositis werden die Muskelfasern durch CD8 + cytotoxische T-Lymphozyten zerstört, welche
die Muskelfaser kontaktieren oder sogar invadieren (Mantegazza et al., 1993; Engel und
Arahata, 1984; zusammengefasst in Engel und Hohlfeld, 2005). Die Zerstörung der
Muskelzelle wird hauptsächlich durch das porenbildende Protein Perforin vermittelt (Goebels
et al., 1996). Dieser gerichtete und TZR-abhängige Vorgang ist eine typische immunologische
Synapse wie sie üblicherweise zwischen T-Lymphozyten und ihrer Target-Zelle auftritt
(Stichcombe et al., 2001; Purbhoo et al., 2004). Da nicht relevante bystander-Zellen meist
keinen Kontakt zur Muskelfaser haben, sondern sich im Zellzwischenraum befinden, sind diese
so leicht von den cytotoxischen Effektor-T-Zellen zu unterscheiden. Die Detektion der CD8 + -
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