Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

III. Ergebnisse
8. Versuch der Identifizierung eines möglichen Antigens
durch Positional Scanning-Combinatorial Peptid Libraries
(PS-CPL)
Die Versuche aus Abschnitt 7 zeigten, dass es sich wahrscheinlich weder um ein
muskelspezifisches Autoantigen noch um ein ubiquitär exprimiertes Selbstantigen handelt.
Wir setzten die Suche mittels Positional Scanning-Combinatorial Peptid Libraries (PS-CPL)
fort. Mit diesem Verfahren ist es möglich ein Peptidmotiv zu identifizieren, welches für eine
TZR-Aktivierung verantwortlich sein könnte. Nach der Detektion eines solchen Peptidmotivs
können dann Kandidatenpeptide synthetisiert und auf ihre Aktivierungsfähigkeit getestet
werden. Die hier verwendete Library bestand aus 180 synthetisch hergestellten Peptidmixen.
Jedes Peptid setzte sich aus neun Positionen zusammen. Eine der neun Positionen entspricht
einer definierten Aminosäure, alle anderen Positionen sind ein Gemisch aus allen 20
möglichen Aminosäuren. Das Prinzip der PS-CPL ist im Methodenteil (II.4.9) genauer
erläutert.
In der Literatur gibt es einige Beispiele dafür, dass bei der Analyse eines TZR mit einer
bekannten Spezifität in den PS-CPL-Versuchen nicht unbedingt auch das Peptid gefunden
wird.
8.1 PS-CPL-Versuch mit den TZR JM22 transfizierten Maus-
Hybridomzellen
Da die TZR-Transfektante JM22 in der Literatur gut untersucht ist und auch die
Aminosäuresequenz des flu-Peptids 58-66 (GILGFVFTL) bekannt ist, testeten wir die PS-CPL
zunächst anhand dieses Modells.
Hierfür wurden die HLA-A*02-positiven LTK-Zellen als APZ verwendet und am Vortag
ausgebracht. Am folgenden Tag wurden die Peptidmixe der PS-CPL für 6h zugegeben und
über Nacht zusammen mit der JM22-Transfektante co-kultiviert. Der Überstand wurde am
nächsten Tag in den IL-2-ELISA eingesetzt.
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