Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

IV. Diskussion
durch das entsprechende HLA-Molekül zu präsentieren und somit die TZR-Transfektanten zu
aktivieren. Proteine werden in unterschiedlichen Zelltypen auf verschiedene Weise prozessiert
und durch das Protasom in unterschiedliche Peptidfragmente zerlegt. Dasselbe Protein könnte
in den verwendeten TE671-Zellen in andere Peptide zerlegt und präsentiert werden als in den
Muskelzellen des Patienten (zusammengefasst in van den Eynde und Morel, 2001). Außerdem
könnten bei den TE671-Zellen patientenspezifische Mutationen, so genannte SNPs, die
Detektion des Antigens behindern (Brookes, 1999). Hätte der hier untersuchte Patient einen
solchen Polymorphismus, welcher in den verwendeten Modellzelllinien nicht auftritt, könnte
das gesuchte Peptid nicht von den TZR-Transfektanten erkannt werden.
Da wir weder mit Hilfe der patientenspezifischen EBV-B-Zellen noch mit Hilfe der TE671-
Zellen ein Antigen detektieren konnten, verwendeten wir für die weitere Antigensuche
verschiedene Positional Scanning-Combinatorial Peptide Libraries (PS-CPL). Mit Hilfe dieser
Methode ist es möglich, ein Peptidmotiv zu detektieren, welches den TZR aktiviert.
Ausgehend vom erhaltenen Peptidmotiv werden anschließend Kandidatenpeptide synthetisiert
und diese auf ihre Aktivierungsfähigkeit getestet, um ein definiertes Peptid zu erhalten. Da wir
den TZR Vβ1-Vα2.2-Klon (435) 20mal im Patienten PM16488 fanden und dieser somit am
interessantesten erschien, führten wir die PS-CPL-Versuche zunächst nur mit dieser TZR-
Transfektante sowie mit dem Modell-TZR JM22 durch. Die Experimente mit dem TZR Vβ1-
Vα2.2 ergaben jedoch kein eindeutiges Peptidmotiv. Zum einen waren die erhaltenen Signale
des IL-2-ELISAs sehr schwach, zum anderen waren sie in darauf folgenden Versuchen oftmals
nicht reproduzierbar oder sogar widersprüchlich. Um möglicherweise doch noch ein
Peptidmotiv zu erhalten, wurden die Versuche in Kollaboration mit dem Labor von Darcy
Wilson, San Diego, USA, nochmals wiederholt. Die Methode der PS-CPL wurde in dieser
Gruppe entwickelt und ist deshalb dort sehr gut etabliert. Doch auch die Gruppe von D. Wilson
konnte durch wiederholte Experimente kein eindeutiges Peptidmotiv detektieren. Der Grund
liegt wahrscheinlich an der zu geringen Affinität und der fehlenden Degeneration des
untersuchten TZR (persönliche Mitteilung von D. Wilson).
Die PS-CPL-Experimente mit dem Modell-TZR JM22 (Vβ17-Vα10), der das Infuenza A
Virus Matrix Peptid flu 58-66 erkennt (Lehner et al., 1995, Moss et al., 1991), lieferten
ebenfalls keine aussagekräftigen Ergebnisse. Die Auswertung der Versuche zeigte keine IL-2-
Signale entsprechend der Aminosäuresequenz des flu-Peptids GILGFVFTL bzw. Signale in
homologen Aminosäuren. Zudem waren die Signale wie auch beim TZR Vβ1-Vα2.2 (435) des
Patienten PM16488 sehr niedrig und überwiegend nicht reproduzierbar, was die Auswertung
der Daten zusätzlich erschwerte.
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