Identifikation und Charakterisierung - OPUS - Universität Würzburg

III. Ergebnisse
Abb. 44: Position 3 und 6 des PS-CPL-Assays mit der Transfektante 435 (IL-2-ELISA)
Die beiden Diagramme zeigen beispielhaft drei Positionen (Position 3 und 6) des PS-CPL-Experiments mit
autologen EBV-B-Zellen als APZ und den mit dem TZR 435 transfizierten Maus-Hybridomzellen des
Patienten PM16488. Die APZ wurden ausgebracht und 6h mit den Peptidmixen inkubiert. Über Nacht wurde
die Transfektante 435 zugegeben und am folgenden Tag der IL-2-Gehalt im Überstand mittels IL-2-ELISA
gemessen. Die x-Achse zeigt die 20 verschiedenen AS, die y-Achse zeigt die optische Dichte bei einer
Wellenlänge von 450nm.
Auch hier sind wiederum nur zwei charakteristische Positionen (Position 3 und 6; Abb. 44)
dargestellt, welche ein ähnliches Ergebnis zeigen wie die Experimente mit dem Klon JM22.
Das IL-2-Sekretionsmuster der Position 3 z.B. ist in allen drei Versuchen unterschiedlich. Die
erhöhten Signale treten jeweils in anderen Aminosäuren auf. Position 6 weist in zwei der drei
Versuche keine IL-2-Sekretion auf. Lediglich im letzten Versuch tritt ein erhöhtes Signal in
der Aminosäure Isoleucin auf.
Diese mangelnde Reproduzierbarkeit, welche bereits bei den Versuchen mit dem Klon JM22
auftrat, liegt vermutlich an der zu geringen Affinität sowie zu geringen Degeneration des TZR-
Peptid/MHC-Komplexes. Ist die Aktivierung der TZR-Transfektante nicht stark genug, kann
dieses Signal im IL-2-ELISA nicht detektiert werden. Durch die geringe Signalintensität
können ebenfalls leicht falsch positive Signale auftreten.
8.3 Antigensuche mittels modifizierter PS-CPL
Oftmals wird ein TZR stärker aktiviert, wenn das Peptid in modifizierter Form vorliegt oder
wenn anstatt eines Neunerpetids ein Zehnerpeptid dargeboten wird. Aus diesem Grund setzten
wir Peptide in die Library-Versuche ein, die am C-terminalen Ende amidiert bzw. am Nterminalen
Ende acetyliert vorlagen. Außerdem verwendeten wir zusätzlich eine Zehnerpeptid-
Library. Von diesen drei Peptid-Libraries standen lediglich Position 6 und 7 zur Verfügung.
Die Auswertung der PS-CPL-Versuche mit den beiden Neunerpeptid-Libraries sowie mit der
Zehnerpeptid-Library zeigte kein signifikantes IL-2-Signal in Position 6 bzw. 7 (Ergebnisse
nicht gezeigt).
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