Rôle de l'herpèsvirus humain de type 6 dans le ... - Epublications

Dilution du stock viral
Volume de stock
utilisé (µl)
% de cellules infectées
Nombre de cellules
infectées/5.10 5 cellules
1 / 16 12.5 6 35.10 3
1 / 8 25 10 50.10 3
1 / 4 50 19 95.10 3
1 / 2 100 37 185.10 3
pur 200 62 310.10 3
Tableau 8 : Titrage du stock de virions purifiés.
a b c
Figure 18 : Immunomarquage de la protéine virale p41 sur des cellules MT4 seules (a), ou co-
cultivées avec la souche HST de l’HHV-6B (b), photographies de miscroscopie à fluorescence
(x200). (c) : zoom (x640) sur une cellule infectée : localisation nucléaire de la protéine p41.
La réplication virale a été quantifiée en utilisant deux techniques différentes. La première
technique a consisté en un immunomarquage fluorescent dirigé contre le facteur de processivité
de l’ADN polymérase virale de l’HHV-6, la protéine p41, comme décrit précédemment pour le
titrage du stock viral. La PCR quantitative en temps réel a parallèlement été utilisée pour
quantifier la réplication virale. Basée sur la chimie Taqman, la technique utilisée permet
l’amplification d’un fragment de 99 pb du gène U22 du génome de l’HHV-6 (Collot et al., 2002).
Ce gène est présent de façon unique sur le génome viral. La quantification du nombre de copies
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