THESE UNIQUE El Hassane Kéhien-Piho TOU - Nutridev

Matériels et méthodes
l’opération précédente est renouvelée. Puis le culot est rincé avec 3 ml de solution d’éthanol
(80%), centrifugé et le surnageant est recueilli. Les 3 surnageants sont cumulés puis évaporés
sous vide pendant une nuit à température ambiante (SPEEDVAC RC 10.10). Le culot obtenu
est stocké au froid et, repris au moment du dosage dans 10 ml d’eau ultra pure puis filtré. Le
filtrat recueilli sert aux dosages du glucose, fructose, maltose et saccharose et des α-
galactosides (raffinose, stachyose, verbascose et mélibiose), effectué par HPIC (Dionex DX
500), en utilisant une colonne Carbo PAC PA1, et un détecteur par ampérométrie pulsée.
L’éluant est de la soude 120mM.
III.1.8. Dosage des produits de fermentation
L’éthanol, les acides lactique et acétique ont été identifiés comme les principaux produits de
fermentation. Le dosage des produits de fermentation a été réalisé par HPLC (Calderon et al,
2001) en utilisant une colonne Aminex HPX-87H (Biorad, Yvry-sur-Seine, France) reliée à
un détecteur d’index de réfraction (Waters 2410, France).
III.2. Analyses microbiologiques
III.2.1. Préparation des milieux de culture et du diluant
Des milieux de culture lyophilisés ont été utilisés. Cependant, le milieu MRS-Amidon a été
préparé à partir des éléments qui le compose. Les milieux de culture utilisés étaient :
- Gélose MRS-glucose : pour la culture et l’isolement des bactéries considérées
lactiques (BL)
- Milieu MRS-Amidon : pour la culture et l’isolement de la flore lactique
amylolytique (BLA).
- Milieu Yeasts Glucose Chloramphénicol (YGC) : pour la culture des levures
- Milieu Plate Count Agar (PCA) : pour la culture de la flore aéromésophile
totale
La composition détaillée de tous les milieux de culture se trouve en annexe 2. Pour les
dilutions, une solution physiologique à 9% de NaCl a été utilisée. Le même diluant a été
utilisé pour la préparation des solutions mères et les dilutions en cascade. Pour la culture des
bactéries lactiques, un milieu MRS-glucose déshydraté (MRS-broth) a été utilisé après
resuspension dans l’eau conformément aux instructions du fabricant. De l’agar (15%) a été
ajouté à ce milieu pour les isolements et les purifications en boîte de Pétri. Les pH des milieux
ont été mesurés et ajustés le cas échéant aux pH appropriés.
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