THESE UNIQUE El Hassane Kéhien-Piho TOU - Nutridev
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Matériels et méthodes<br />
III.2.4. Caractérisation des souches bactériennes issues de 12 échantillons de pâtes fermentées<br />
prélevées dans 12 ateliers de Ouagadougou<br />
III.2.4.1. Préparation des cultures en culot<br />
Nous avons repiqué dans chaque tube contenant du bouillon MRS une souche. Nous avons<br />
ensuite incubé ces tubes pendant 12 à 24 h (selon la croissance obtenue) à 30°C. Après la<br />
croissance nous avons récupéré le culot de bactéries par centrifugation pendant 10 min à 5000<br />
tpm. Ce culot est ensuite lavé et centrifugé deux fois à l’eau distillée stérile. Le lavage permet<br />
d’éliminer toutes traces de milieu dans le culot et de ne garder que les souches bactériennes.<br />
Enfin, les différentes caractérisations ont été réalisées avec le culot obtenu.<br />
III.2.4.2. Coloration Gram<br />
La coloration différentielle de Gram a été faite à l’aide du kit prêt à l’emploi de BioMérieux.<br />
III.2.4.3. Catalase<br />
La caractérisation par réaction enzymatique du type catalase a été faite à partir du kit « ID<br />
color catalase » prêt à l’emploi de BioMérieux.<br />
III.2.4.4. Galeries API 50 CHL<br />
Les profils biochimiques des souches ont été réalisés grâce à l’utilisation de galeries API 50<br />
CHL (BioMérieux) analysés par le logiciel APILAB plus. La classification taxonomique des<br />
isolats a été réalisée en établissant une matrice des distances à partir du calcul de l’indice de<br />
dissimilitude de Nei et Li. Basé sur cette matrice, un dendrogramme a été établi en utilisant<br />
l’algorithme UPGMA (Unweighted Pair Group Method with Arithmetic mean).<br />
III.2.4.5.Type métabolique<br />
Le type métabolique des souches a été déterminé par dosage des acides acétique et lactique, et<br />
éthanol par HPLC (High Performance Liquid Chromatography).<br />
III.3. Analyses statistiques<br />
Toutes les expériences ont été répliquées trois fois et le dosage des échantillons a été fait en<br />
double. L’analyse statistique des données a été réalisée à l’aide du logiciel Statgraphics Plus<br />
version 5.1 (Manugistics, Inc., Etats-Unis). Le niveau de signification (P ≤ 0,05) des<br />
différences entre les échantillons a été testé par analyse de variance (ANOVA) en utilisant le<br />
test des comparaisons multiples de Duncan pour séparer les moyennes (Duncan, 1955).<br />
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