Biologische Therapien und Krebs - the European Oncology Nursing ...

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die Primer ihre komplementäre Sequenz am separierten Strang finden und sich an sie binden.
Die Polymerase kann die Primer in neue komplementäre Stränge einbauen (Abbildung 5.7).
Durch wiederholte Erhitzungs- und Abkühlungszyklen multipliziert sich die gewünschte DNA-
Sequenz exponentiell. Jeder neue Doppelstrang teilt sich und bildet so zwei Vorlagen für die
weitere Synthese. In ungefähr einer Stunde kann in 20 PCR-Schritten das gewünschte Stück
millionenfach amplifiziert werden. Am Ende der PCR ist es üblich, das Produkt unter
Anwendung von Agarose-Gel-Elektrophorese zu analysieren und die produzierte DNA zu
färben. Andererseits kann das PCR-Produkt an einen Plasmid- oder einen Bakteriophagen-Vektor
zum Klonen und zur weiteren Beurteilung gebunden werden.
Eine wichtige Eigenschaft der PCR ist ihre extreme Sensitivität. Wenn die Primer optimal sind,
kann PCR exakte Mengen der gesuchten DNA ermitteln. Dies macht PCR zu einer hoch
wertvollen Technik der Diagnostik. PCR kann ebenfalls für die Amplifikation von RNA verwendet
werden, unter der Bedingung, dass diese zuerst mit Hilfe der Reverse-Transkriptase in eine
Einzelstrang-cDNA konvertiert wird. Diese Methode wird Reverse-Transkriptase PCR genannt
(RT-PCR). Eine Hauptanwendung der RT-PCR ist die Analyse des Ausmasses der Gen-Expression.
Das Reaktions-Gemisch enthält
die ausgewählte DNA-Sequenz
für die Amplifikation, zwei Primer
(P1 und P2) und hitzebeständige
Taq-Polymerase
Das Reaktions-Gemisch wird auf 95ºC
erhitzt, um die gewünschte DNA zu
denaturieren. Die anschliessende
Abkühlung auf 37ºC erlaubt es den
Primern, die komplementäre Sequenz
der gewünschten DNA zu hybridisieren.
P1
Ausgewählte DNA
Taq
P2
Erster Zyklus
Bei einer Erhitzung auf 72ºC produziert
die Taq-Polymerase komplementäre
Stränge von den Primern
Der erste Synthese-Zyklus
führt zu zwei Kopien der
gewünschten DNA-Sequenz
DNA wird
denaturiert
Primer werden
hybridisiert
Zweiter Zyklus
Neue DNA-Stränge
werden aufgebaut
Der zweite Synthese-
Zyklus führt zu vier Kopien
der gewünschten DNA-Sequenz
Weitere Zyklen
Abbildung 5.7. Überblick über den PCR-Prozess.
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