Biologische Therapien und Krebs - the European Oncology Nursing ...

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Kapitel 5. Technologien zur Ermöglichung biologischer Therapien
1. Verschiedene Enzyme und Technologien werden benutzt, um DNA zu analysieren und zu
manipulieren. Wählen Sie aus der unten stehenden Liste die passenden Enzyme oder
Techniken aus, um die folgenden Aktivitäten auszuführen:
DNA-Sequenzierung Gel-Elektrophorese Ligase
Nukleinsäure-Hybridisierung Polymerase Restriktionsenzym
Reverse Transkription
DNA-Synthese. Polymerase
Produziert zusätzliche DNA (cDNA) von Boten-RNA (mRNA). Reverse Transkription
Schneidet oder spaltet DNA für die Analyse in Fragmente. Restriktionsenzym
Verbindet DNA-Fragmente. Ligase
Separiert DNA-Fragmente entsprechend ihrer Grösse. Gel-Elektrophorese
Ordnet die Basen-Paare in DNA-Fragmente. DNA-Sequenzierung
Ermöglicht die genaue Lokalisation der DNA oder RNA. Nukleinsäure-Hybridisierung
2. Das Klonen von Genen ist entscheidend für viele Techniken bei der Analyse von Genen und
für das Verstehen ihrer Funktion. Beschreiben Sie die grundlegenden Schritte für das Klonen
von DNA.
Schritt 1: Die DNA wird von der Zelle isoliert und gereinigt.
Schritt 2: Die gereinigte DNA wird in Stücke unterteilt mit Hilfe von Restriktionsenzymen.
Schritt 3: Ein DNA-Fragment, welches das Gen enthält, das geklont werden soll, wird in ein
zirkuläres DNA-Molekül, genannt Vektor, eingefügt. So wird ein rekombinantes DNA-
Molekül hergestellt.
Schritt 4: Der Vektor dient als Transportmittel, welches das Gen in die Wirtzelle transportiert.
In der Wirtzelle vermehrt sich der Vektor und stellt zahlreiche identische Kopien her, nicht
nur von sich selbst, sondern auch von dem Gen, in welchem er sich befindet.
Schritt 5: Wenn sich die Wirtzelle teilt, enthalten die neuen Zellen Kopien des
rekombinanten DNA-Moleküls, und weitere Vektor-Reproduktion findet statt.
Schritt 6: Nach einer grossen Zahl von Zellteilungen ist eine Kolonie oder ein Klon
identischer Wirtzellen entstanden. Jede enthält eine oder mehrere Kopien des
rekombinanten DNA-Moleküls. Das Gen, das vom rekombinanten Molekül getragen wird, ist
nun geklont.
3. Manchmal werden viele Fragmente zur selben Zeit geklont, um eine Art Bibliothek von
Klonen aufzubauen. Wie kann ein Klon, welcher ein spezielles DNA-Fragment enthält,
identifiziert werden?
Das Screening der Gen-Sammlung kann den Klon, welcher das gesuchte DNA-Fragment
enthält, identifizieren. Ein Stück saugfähiges Papier wird in die Kultur mit wachsenden
Kolonien eingetaucht. Diese kann dann mit einer radioaktiven DNA-Probe, welche die
Sequenz des gesuchten Gens enthält, getestet werden. Die radioaktive Probe hybridisiert
zum entsprechenden DNA-Fragment und kann dann sichtbar gemacht werden, indem das
saugfähige Papier auf einen fotografischen Film exponiert wird.
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