Biologische Therapien und Krebs - the European Oncology Nursing ...

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unterschiedlichen Wirt, mit dem Ziel, identische Kopien zu produzieren. Das Klonen erlaubt die
Analyse von Gen-Sequenzen. Umgekehrt erlaubt dieses Wissen die Ableitung einer Protein-
Sequenz, für welche die DNA kodiert. Trotzdem ist es nötig, die Aminosäuren-Sequenz mit der
eines besser charakterisierten Eiweisses zu vergleichen, um die dreidimensionale Struktur des
Eiweisses bestimmen zu können. Wenn Eiweisse einen hohen Grad an Sequenz-Ähnlichkeit
aufweisen (Homologie), wird angenommen, dass auch die Funktion ähnlich ist.
Die grundsätzliche Klon-Methode
Die wesentlichen Schritte um ein Gen zu klonen (Abbildung 5.3):
1. Ein Fragment der DNA, welches das zu klonende Gen enthält, wird in ein zirkuläres DNA-
Molekül, genannt Vektor, eingesetzt. Das Einfügen eines zu untersuchenden Gens in den
Vektor produziert eine Chimäre beziehungsweise ein rekombinantes DNA-Molekül.
2. Der Vektor dient als Transportmittel, um das Gen in die Wirtzelle zu transportieren. In der
Wirtzelle vervielfacht sich der Vektor in zahlreiche identische Kopien, nicht nur von sich
selbst, sondern auch von dem Gen, in dem er sich befindet.
Fremde DNA
Gen für
Antibiotika-
Resistenz
Plasmid
PstI
PstI
Ausgewählte Region
PstI
1. Schritt
PstI
PstI
Haftende
Enden
Hybridisierung mit
Hilfe von DNA-Ligase
Rekombinante
DNA
Insertion (Einfügen)
von DNA
2. Schritt
Bakterienzelle
Bakterien-
Chromosom
Klonen
3. Schritt
Klon
4. Schritt
Bakterien beschichten ein
Antibiotika-enthaltendes Medium
Nur Bakterien mit der rekombinanten
DNA können wachsen
Kultur
DNA-
Reinigung
Abbildung 5.3. Grundsätzliche Methode für das Klonen von Genen in einem Plasmid.
5.6