Identifizierung und Charakterisierung von potentiellen ...

Diskussion 97
Überleben der Mikroorganismen könnte durch verlängerte Ribosomenerhaltung begünstigt
werden.
Neben dem YhbH ist in der gleichen Fraktion auch noch CsrA identifiziert worden (s. Kap.
5.2.1). Es kann aber nicht abschließend geklärt werden, ob nicht auch CsrA als das erhöht
erscheinende Protein in der Fraktion erachtet werden muss, bzw. welches der beiden Proteine
im Vergleich zum Wildtyp tatsächlich hochreguliert ist. Es spricht aber mehr für YhbH als für
CsrA, da letzteres – wie in Kap. 2.2.1 geschildert – L. pneumophila in der replikativen,
avirulenten Phase hält. Dass CsrA in der spätstationären Phase dann hier dennoch identifiziert
wurde, ist nicht ungewöhnlich, da es von zwei nichtkodierenden RNA-Molekülen auf Protein-
Ebene und nicht auf Transkriptom-Ebene inhibiert wird [Sahr et al., 2009].
6.2.3 Fokus der weiteren Bearbeitung auf das PilN-Protein
PilN ist das einzige Protein, welches in einer der L. pneumophila-Mutanten (im vorliegenden
Fall: flaR - -Mutante, s. Tab. V.2) im Vergleich zum Wildtyp gänzlich gefehlt hat. Auch wenn
es nicht mit beiden Protein-Auftrennungsmethoden detektiert werden konnte, so zeigten sich
alle anderen identifizierten Proteine nur in unterschiedlicher, wenngleich signifikanter
Expressionsstärke. Aber auch in der Arbeit von Lebeau und Kollegen [2005] ist PilN in der
zweidimensionalen gelelektrophoretischen Proteom-Analyse bei insgesamt 150 identifizierten
Proteinen nicht aufgedeckt worden.
Da PilN Bestandteil des TypIV-Pilus von Legionella pneumophila Corby ist und der TypIV-
Pilus nach dem Koch-Postulat und diversen Literaturangaben durchaus als Virulenzfaktor
angesehen werden kann (s. auch Kap. 2.3 und 2.3.1), bietet sich hier gerade für die
röntgenkristallographische Strukturaufklärung ein sehr interessantes Ziel. Das gilt verstärkt
auch für eine eventuell darauf aufbauende, entsprechende Synthese eines niedermolekularen
Inhibitors, da PilN – zumindest bei Pseudomonas aeruginosa – einen essentiellen Bestandteil
des Pilus darstellt und insofern ein potentielles Therapeutikum-Ziel, mindestens jedoch für invitro-Versuche,
darstellt. Ferner könnte die Strukturaufklärung einen Hinweis auf die noch
unbekannte Funktion von PilN und dessen Zusammenspiel und Aufgabe im Pilusaufbau
liefern.
Dass die flaR - -Mutante womöglich tatsächlich pililos ist oder zumindest in der Pilierung
eingeschränkt erscheint, zeigen auch die Ergebnisse der „twitching motility“-Tests (Kap.
5.6.1). So hat sich die Mutante nach 92 Std. auf dem Kohleagar nur um ca. 1,4 mm, der
Wildtyp hingegen um 2,3 mm ausgebreitet. Dass sich die flaR - -Mutante allerdings bei 37 °C
trotzdem noch ausbreitet und nicht wie eine pilE-Mutante bei dieser Temperatur ihre