Identifizierung und Charakterisierung von potentiellen ...

Diskussion 87
VI
Diskussion
Legionella pneumophila ist der Hauptverursacher der Legionellen-Pneumonie, der sog.
Legionärskrankheit. Mehr als 90 % der aus Patienten isolierten Legionellaceae fallen auf diese
Erregerart zurück. Warum gerade pneumophila im Vergleich zu den anderen 51 bisher
entdeckten Legionella-Arten so virulent wirkt, ist nicht geklärt. Vermutet werden entweder
noch nicht ausgemachte artspezifische Virulenzfaktoren oder eine effizientere Regulation der
bereits bekannten Pathogenitätsfaktoren. An dieser Stelle setzt die vorliegende Arbeit an. Der
Wildtyp Legionella pneumophila Corby und zwei Regulationsmutanten (flaR - , fliA - , s. Kap.
2.2.2), deren Verknüpfung mit der Regulation von Virulenzfaktoren bekannt, aber nicht
gänzlich aufgeklärt ist, wurden auf Proteom-Ebene miteinander verglichen. Dazu wurde die
altbekannte zweidimensionale Gelelektrophorese und eine relativ neuartige zweidimensionale
Hochdruckflüssigkeitschromatographie (PF-2D) [Lubman et al., 2002] zur Auftrennung des
cytosolischen Gesamtproteins eingesetzt. Aufgedeckte Expressionsunterschiede könnten
dabei zum Verständnis der erhöhten Virulenz beitragen, die Regulation besser verständlich
machen oder neue potentielle Virulenzfaktoren aufdecken.
Die so detektierten Unterschiede (s. Tab. V.1 und V.2) sollten ebenfalls bewertet und weiter
molekularbiologisch analysiert werden. RT-PCR, mikrobiologische Tests und Protein-
Kristallisation sind somit hier ebenfalls zum Einsatz gekommen. Die verschiedenen
Techniken sollten dabei einerseits die Ergebnisse der Protein-Untersuchung unterstützen und
andererseits versuchen, das in dieser Arbeit identifizierte, im TypIV-Pilus-Aufbau involvierte
Protein PilN strukturbiologisch aufzuklären.
6.1 Beurteilung und Vergleich der beiden zweidimensionalen Protein-
Auftrennungsmethoden zur Identifizierung neuer putativer
Virulenzfaktoren von Legionella pneumophila Corby
Zunächst richtet sich das Augenmerk auf die Handhabe und den Zeitaufwand beider
Techniken. Der Ablauf bis hin zum Vorliegen des Gesamtproteins ist bei der
Gelelektrophorese und bei der Flüssigchromatographie gleich. Die isoelektrische
Fokussierung der zweidimensionalen Elektrophorese ist im Vergleich zur Chromatographie
wesentlich zeitaufwendiger. Das liegt unter anderem an der hier verwendeten
Flachbettmultiphorese, die mit dem externen zur Verfügung stehenden Spannungsgeber nur