Identifizierung und Charakterisierung von potentiellen ...

Material 31
3.3.4 Lösungen für MALDI-TOF-Massenspektrometrie
• Waschlösung A: 50 % (v/v) Acetonitril, 50 % ddH 2 O.
• Waschlösung B: 50 % (v/v) Acetonitril, 50 mM Ammoniumcarbonat in ddH 2 O.
• Waschlösung C: 50 % (v/v) Acetonitril, 10 mM Ammoniumcarbonat in ddH 2 O.
• Waschlösung D: 10 mM Ammoniumcarbonat, in ddH 2 O.
• Trypsinlösung: 20 µg Trypsin werden aktiviert in 100 ml 1 mM HCl und 900 ml 10 mM
Ammoniumcarbonat.
• Matrixträgerlösung: 33 % Acetonitril, 0,1 % Trifluoressigsäure, 67 % ddH 2 O.
• Matrix: α-Cyano-4-Hydroxy-Zimtsäure, gesättigt in Matrixträgerlösung.
3.3.5 Lösungen für Protein-Färbungen
• Coomassie Blue-Färbung: 42,5 % (v/v) Ethanol, 10 % (v/v) Essigsäure, 5 % (v/v)
Methanol, 2 g/l Coomassie Brillant Blue G 250, 0,5 g/l Coomassie Brillant Blue R 250, in
ddH 2 O gelöst.
• Ponceau-Rot-Färbung: 0,25 % (w/v) Ponceau S, 3 % Essigsäure in ddH 2 O lösen.
• Entfärber-/Fixierlösung: 10 % Essigsäure, 30 % Ethanol, in ddH 2 O vermengen.
3.3.6 Lösungen und Puffer für Westernblot und Immunodetektion
• Anodenpuffer 1: 0,3 M Tris, 20 % Methanol.
• Anodenpuffer 2: 25 mM Tris, 20 % Methanol.
• Kathodenpuffer: 20 mM 6-Aminocapronsäure, 10 mM Tris, 10 % Methanol.
• Waschpuffer: 20 mM Tris/HCl pH 7,6, 150 mM NaCl, 0,2 % Tween 20.
• Blockpuffer: 5 % BSA in Waschpuffer.
• Primärantikörper (Anti-His oder Anti-GST): 1:10000 oder 1:5000 Verdünnung in
Waschpuffer mit 1 % BSA.
• Sekundärantikörper (mit alkalischer Phosphatase): 1:10000 Verdünnung in Waschpuffer
mit 1 % BSA.
• Alkalischer Phosphatasepuffer: 100 mM Tris/HCl, pH 9,5, 100 mM NaCl, 5 mM MgCl 2 .
• Färbelösung: 44 µl NBT (7,5 % NBT in 70 % Dimethylformamid), 33 µl BCIP (5 % BCIP
in 100 % Dimethylformamid) in 10 ml alklischen Phosphatasepuffer.