Identifizierung und Charakterisierung von potentiellen ...

Ergebnisse 56
V
Ergebnisse
5.1 Übersicht über die zweidimensionale Gesamtprotein-Auftrennung
mittels der SDS-PAGE
Mit der zweidimensionalen SDS-PAGE soll der Wildtyp Legionella pneumophila Corby auf
Proteom-Ebene mit den Mutanten flaR - und fliA - sowie dem Umweltstamm Legionella
hackeliae verglichen werden. Beide Mutanten sind Regulationsmutanten, die möglicherweise
die Expression der Flagellation oder anderer damit verbundener Virulenzfaktoren steuern. L.
hackeliae gehört zu den Spezies, die zwar noch die Legionärskrankheit auslösen können, aber
im Gegensatz zur pneumophila-Art – die in über 90 % aller Legionellosen als Verursacher
identifiziert wird – nur in sehr wenigen Fällen als Auslöser der Lungenkrankheit festgestellt
wird. Da die Unterschiede, die die stärkere Virulenz von L. pneumophila zu anderen Spezies
ausmachen, entweder nur sehr gering oder bisher gar nicht bekannt sind und keine
vergleichenden Proteomprofile von L. hackeliae und L. pneumophila beschrieben sind, ist die
Spezies L. hackeliae miteinbezogen worden.
Alle Stämme werden in der spätstationären Wachstumsphase geerntet, in dem Stadium, in
dem die Bakterien in die virulente, transmissive Phase übergehen [Byrne & Swanson, 1998].
Neben der zweidimensionalen Auftrennung mittels Gelelektrophorese kommt noch das
Verfahren der zweidimensionalen Hochdruckchromatographie, das PF-2D-System, zum
Einsatz. Beide Methoden sollen später bewertet werden, um Aussagen über das Auffinden
neuer oder bereits beschriebener Virulenzfaktoren treffen zu können.
5.1.1 Unterschiede der Protein-Muster des Wildtyps im Vergleich zu den Mutanten
flaR - und fliA - sowie der Spezies L. hackeliae
Die ersten isoelektrischen Fokussierungen des cytosolischen Gesamtproteins sind im Bereich
von pH 3-10 durchgeführt worden (Daten nicht gezeigt). Basische Proteine und auch integrale
oder periphere Membranproteine sind aber aufgrund ihrer Beschaffenheit nur sehr schwer in
die erste oder zweite Dimension zu bringen und fehlen daher meist auf dem Gelbild [Pasquali
et al., 1997]. Der Bereich im pH von 8-10 bleibt infolgedessen meist ohne sichtbare Proteine,
weswegen auf die pH-Streifen 4-7 umgeschwenkt wurde – auch um die Auflösung der
Trennung, der in diesem Bereich vermehrt sichtbaren Proteine zu verbessern.