Identifizierung und Charakterisierung von potentiellen ...

Ergebnisse 81
a)
b)
Abb. V.23 Optimierte Kristalle, durch Polarisationsfilter betrachtet (a) und ohne Filter (b). Die Grund-Konditionen
ähneln denen der kleinen Kristalle mit 0,1 M Natriumcitrat, 0,1 M Tris pH 8,0, 20 %(v/v) Isopropanol. Zusätzlich
wurden hier 1,5 %(v/v) Glycerin genutzt. Die Kristallisationsplatten wurden bei RT für ca. 2-3 Monate gelagert.
Vorgelegt wurden 2 µl Protein (9 mg/ml), dann mit 2 µl Puffer vermengt. Die Kristalle zeigen die gleiche
Morphologie wie in Abb. V.22, sind aber bis zu 0,4 mm lang.
Alle hier gezeigten Kristallbilder sind Kristalle vom PilN-Protein inklusive Histidin-Tag.
Vom Histidin-Tag freien PilN konnten zwar ebenfalls Kristalle produziert werden (ca. 0,1 x
0,04 x 0,04 mm 3 groß), jedoch waren diese derart instabil, dass sie bereits kurz nach Öffnen
der Kristallisationskammer zerfielen und somit nicht für eine Untersuchung am
Röntgendiffraktometer genutzt werden konnten.
5.4.2 Übersicht der Röntgenbeugungsdaten
Kristalle von der Länge 0,2-0,4 mm (vergleiche Abb. V.23) sind in kryogene Bedingungen (s.
Kap.4.9.3) transferiert worden, bevor sie am BESSY in Berlin von Dipl.-Biochem. Robert
Wrase zur Datenaufnahme benutzt wurden. Dabei konnten Diffraktionsdaten bis zu einer
Auflösungsgrenze von 3,2 Å erhalten werden (s. Abb. V.24). Auch andere Kristalle aus
annähernd gleichen Kristallisationsbedingungen generierten Datensätze von ähnlicher
Qualität.
Die Datenbilder sind mit den Programmen MOSFLM (v7.04) und SCALA (v3.3.15) aus der
Programmsammlung CCP4 (v6.12) autoindiziert, integriert und skaliert worden [CCP4, 1994;
Leslie, 1992].