Identifizierung und Charakterisierung von potentiellen ...

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

Einleitung 24 Humanzellen mit den natürlichen Wirten der Legionellen, den Protozoen bzw. Amöben, teilen. Pathogenität wird durch die vielen Virulenzfaktoren vermittelt, die L. pneumophila im Genom kodiert hat. Doch bis auf sehr wenige bis jetzt bekannte Ausnahmen (z. B. das FlaR- Protein) tragen alle Pneumonieerreger oder Pontiac-Fieber verursachende Legionellen diese in Kap. 2.2.1 beschriebenen Pathogenitätsfaktoren. Wieso ist gerade L. pneumophila so virulent? Ursachen könnten entweder noch nicht entdeckte, spezifische pneumophila-Virulenzfaktoren sein oder aber eine effizienter gesteuerte Regulation der Pathogenitäts-faktoren. Um diese Frage zu beleuchten, sollen der Wildtyp-Stamm Legionella pneumophila Corby, ein Patientenisolat aus dem Jahre 1985, zwei Regulationsmutanten (Sigma-Faktor 28, fliA - ; Transkriptions-Regulator, flaR - ) und der Stamm L. hackeliae auf Proteom-Ebene miteinander verglichen werden. Ziel dieser vergleichenden Analyse mittels zweidimensionaler Polyacrylamid-Gelelektrophorese (2D-PAGE) und zweidimensionaler Hochdruck- Chromatofokussierung (PF-2D) ist es, im Muster der cytosolischen Proteome Unterschiede zwischen Wildtyp und Mutanten bzw. dem weniger virulenten Stamm L. hackeliae zu detektieren. Diese beiden verschiedenen Methodik-Ansätze sollten dabei miteinander verglichen und bewertet werden, um abschließend ein Urteil über die Wirksamkeit der beiden Anwendungen zur Entdeckung neuer putativer Virulenzfaktoren abgeben zu können. Per MALDI-TOF-Massenspektrometrie identifizierte Proteine, die beim Wildtyp Legionella pneumophila Corby im Vergleich zu den Mutanten entweder hoch- oder herunterreguliert erscheinen, könnten ausschlaggebend für den Infektionserfolg des Wildtyps sein und daher potentielle, putative Virulenzfaktoren darstellen. Diese putativen Pathogenitätsfaktoren sollten der Protein-Kristallisation unterzogen werden, um die dreidimensionale Struktur röntgenkristallographisch aufzuklären; könnten sich doch manche als antibakterielle Ziele für die Inhibitor-Synthese qualifizieren, was eine Strukturaufklärung unverzichtbar macht. Neben dem Hauptaugenmerk der komparativen Proteom-Analyse sollten alle entdeckten putativen Virulenzfaktoren weiter mikrobiologisch und biochemisch charakterisiert werden. Somit können einmal die Differenzen der Proteom-Ebene auch auf anderem Weg verifiziert werden und zweitens können bei unbekannter Funktion erste Aussagen über Funktionalität, Klasseneinteilung o.ä. getroffen werden. Gerade zur Verifizierung der Proteom-Unterschiede sollte noch die Untersuchung der identifizierten Proteine auf Transkriptom-Ebene mit Hilfe der Real-Time-PCR vollzogen werden, um die Differenz auch innerhalb der Gen-Expression bestätigt zu sehen.
Einleitung 25 Hier noch ein Hinweis zur Orthographie: Diese Arbeit wurde auf Grundlage der neuen amtlichen deutschen Rechtschreibregeln vom 1. August 2006, die vom Rat für deutsche Rechtschreibung vorgeschlagen und von der Kultusministerkonferenz bestätigt wurden, verfasst. Für die Textverarbeitung wurden die allgemeinen Richtlinien des Dudens oder die Empfehlungen der DIN 5008 berücksichtigt.
Seite 1 und 2: Aus dem Institut für Biochemie der
Seite 3 und 4: Inhaltsverzeichnis I I ZUSAMMENFASS
Seite 5 und 6: Inhaltsverzeichnis III 4.8 Aufreini
Seite 7 und 8: Zusammenfassung 1 I Zusammenfassung
Seite 9 und 10: Einleitung 3 II Einleitung 2.1 Das
Seite 11 und 12: Einleitung 5 2.1.1 Vorkommen, Diagn
Seite 13 und 14: Einleitung 7 Institut (RKI) übermi
Seite 15 und 16: Einleitung 9 MOMP bindet den Komple
Seite 17 und 18: Einleitung 11 Inzwischen sind über
Seite 19 und 20: Einleitung 13 Moleküle (sog. Autoi
Seite 21 und 22: Einleitung 15 Abweichend von der du
Seite 23 und 24: Einleitung 17 Erreger der Legionär
Seite 25 und 26: Einleitung 19 Weiterhin ist bekannt
Seite 27 und 28: Einleitung 21 Eine Legionella-Pilin
Seite 29: Einleitung 23 komplexen Strukturen,
Seite 33 und 34: Material 27 3.1.4 Plasmide Zum Eins
Seite 35 und 36: Material 29 • Legionella-Suppleme
Seite 37 und 38: Material 31 3.3.4 Lösungen für MA
Seite 39 und 40: Material 33 • Proteinpuffer: A: 2
Seite 41 und 42: Methoden 35 Brutschrank bei 37 °C
Seite 43 und 44: Methoden 37 4.3.1 Polyacrylamid-Gel
Seite 45 und 46: Methoden 39 4.3.4 Färben und Entf
Seite 47 und 48: Methoden 41 Der Gradient erstreckt
Seite 49 und 50: Methoden 43 • 12 Std. oder ü/N b
Seite 51 und 52: Methoden 45 Denaturierung, Anlageru
Seite 53 und 54: Methoden 47 Verhältnis der Absorpt
Seite 55 und 56: Methoden 49 • 0,8 µl dNTP-Mix (1
Seite 57 und 58: Methoden 51 4.8 Aufreinigung rekomb
Seite 59 und 60: Methoden 53 Flussgeschwindigkeit du
Seite 61 und 62: Methoden 55 4.9.3 Datenaufnahme am
Seite 63 und 64: Ergebnisse 57 Um keine Wachstumspha
Seite 65 und 66: Ergebnisse 59 5 6 7 8 1 3 4 Wildtyp
Seite 67 und 68: Ergebnisse 61 1 2 3 4 5 Wildtyp fli
Seite 69 und 70: Ergebnisse 63 aufgetrennte Gel ist
Seite 71 und 72: Ergebnisse 65 Pfeilenummer im Gelbi
Seite 73 und 74: Ergebnisse 67 Abb. V.8 Fraktionspro
Seite 75 und 76: Ergebnisse 69 beiden markierten Pea
Seite 77 und 78: Ergebnisse 71 vom CsrA oder das Yhb
Seite 79 und 80: Ergebnisse 73 Abb. V.15 Auftrennung
Seite 81 und 82:
Ergebnisse 75 geringer Konzentratio
Seite 83 und 84:
Ergebnisse 77 Vektor/insert E. coli
Seite 85 und 86:
Ergebnisse 79 ein Durchschnittswert
Seite 87 und 88:
Ergebnisse 81 a) b) Abb. V.23 Optim
Seite 89 und 90:
Ergebnisse 83 5.5 Real-Time-PCR-Ana
Seite 91 und 92:
Ergebnisse 85 Hauptursache für die
Seite 93 und 94:
Diskussion 87 VI Diskussion Legione
Seite 95 und 96:
Diskussion 89 Die Auswertung der Ma
Seite 97 und 98:
Diskussion 91 Färbung der Proteine
Seite 99 und 100:
Diskussion 93 Publikationen zwar ü
Seite 101 und 102:
Diskussion 95 Mit der PF-2D konnten
Seite 103 und 104:
Diskussion 97 Überleben der Mikroo
Seite 105 und 106:
Diskussion 99 Im Legionella pneumop
Seite 107 und 108:
Diskussion 101 würde die Expressio
Seite 109 und 110:
Diskussion 103 auf der Vorhersage d
Seite 111 und 112:
Diskussion 105 Die Aufreinigung und
Seite 113 und 114:
Anhang 107 Nr. Nummer OD optische D
Seite 115 und 116:
Anhang 109 Hilfsbereitschaft Dank.
Seite 117 und 118:
Anhang 111 Benson, R.F. & Fields, B
Seite 119 und 120:
Anhang 113 Comolli, J.C., Hauser, A
Seite 121 und 122:
Anhang 115 Gao, L.Y., Susa, M., Tic
Seite 123 und 124:
Anhang 117 Jepras, R.I., Fitzgeorge
Seite 125 und 126:
Anhang 119 Lubman, D.M., Kachman, M
Seite 127 und 128:
Anhang 121 Petermann, N., Hansen, G
Seite 129 und 130:
Anhang 123 Spirig, T., Tiaden, A.,
Seite 131:
Anhang 125 Woods, A.H. & O'Bar, P.R
Alle anzeigen

Identifizierung und Charakterisierung von potentiellen ...

Erfolgreiche ePaper selbst erstellen

Template löschen?

Als Template speichern?