Identifizierung und Charakterisierung von potentiellen ...

Ergebnisse 63
aufgetrennte Gel ist dann in einer Filmkassette ü/N eine Röntgenplatte gelegt worden, die im
Phosphoimager ausgewertet werden kann. Das Auftrennungsbild des intrazellulär
gewachsenen Wildtyps (Abb. V.7) ist dann mit den durch Coomassie Blue gefärbten Gelen
des im Nährmedium gewachsenen verglichen worden.
A
B
C
D
Abb. V.7 Zweidimensionale Auftrennung des Legionella-Proteoms vom im Mausmakrophagen
intrazellulär gewachsenen Bakterium. Radioaktiv markierter Schwefel ( 35 S) im Methionin/Cystein-
Gemisch ist einige Stunden vor der Isolation der Proteine hinzugegeben worden. Die Röntgenplatte ist
zur Exposition auf dem Gel ü/N in einer Filmkassette gelagert worden und am Phosphoimager
ausgewertet worden. Der Fokussierungsbereich erstreckt sich auch hier von pH 4,0 bis 7,0. Markiert sind
die Proteinstellen, die sich im Vergleich zum im Nährmedium gewachsenen Wildtyp als nicht
detektierbar präsentieren.
Als diffizil erwies sich die Zuordnung der radioaktiv markierten Proteine zu den Proteinen,
die mit Coomassie Blue gefärbt sind. Der gravierende Sensitivitätsunterschied erschwerte
somit die Orientierung im Coomassie Blue Gel. Nur wenige Proteinspots konnten daher
zugeordnet werden. Eine differenzierte, akkurate Auswertung unterschiedlich stark
exprimierter Gene ist problematisch. Dies ist bei verschiedenen Färbemethoden immer wieder
der Fall. Oftmals lassen sich dann nur Proteinspots detektieren, die bei einer von zwei zu
gegenüberzustellenden, zweidimensionalen Auftrennungen gänzlich fehlen.