Identifizierung und Charakterisierung von potentiellen ...

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1. Berichterstatter: Prof. Dr. Dr. h.c. Rolf Hilgenfeld 2. Berichterstatter: Prof. Dr. Werner Solbach Tag der mündlichen Prüfung: 08. Dezember 2010
Inhaltsverzeichnis I I ZUSAMMENFASSUNG................................................................................... 1 II EINLEITUNG ................................................................................................... 3 2.1 Das Bakterium Legionella pneumophila – eine biologische, taxonomische und historische Übersicht.................................................................................................................................................. 3 2.1.1 Vorkommen, Diagnostik und Therapie von Legionella-Infektionen ................................................... 5 2.2 Legionellen und ihre Infektiosität ......................................................................................................... 7 2.2.1 Der intrazelluläre Lebenszyklus in Protozoen und Metazoen – und die dabei bedeutsamen Virulenzfaktoren .................................................................................................................................. 8 2.2.2 Die Mutanten Legionella pneumophila Corby flaR - , fliA - und der Stamm Legionella hackeliae ..... 15 2.3 TypIV-Pili pathogener, Gram-negativer Bakterien........................................................................... 17 2.3.1 Die Rolle des Pilus als putativer Virulenzfaktor in L. pneumophila und das am Aufbau beteiligte PilN-Protein ....................................................................................................................................... 19 2.3.2 Das Phänomen “twitching motility” in L. pneumophila .................................................................... 22 2.4 Zielsetzung der vorliegenden Arbeit ................................................................................................... 23 III MATERIAL .................................................................................................... 26 3.1 Chemikalien, Verbrauchsmaterial, Enzyme, Plasmide, Geräte und Bakterienstämme................. 26 3.1.1 Chemikalien und Verbrauchsmaterial................................................................................................ 26 3.1.2 Enzyme, Enzymkits und Aufreinigungskits....................................................................................... 26 3.1.3 Oligonukleotide (Primer) ................................................................................................................... 26 3.1.4 Plasmide............................................................................................................................................. 27 3.1.5 Großgeräte, Laborapparaturen und Websoftware .............................................................................. 27 3.1.6 Bakterienstämme................................................................................................................................ 28 3.2 Nährmedien........................................................................................................................................... 28 3.2.1 Medien, Zusätze und Antibiotika für Legionella-Stämme................................................................. 28 3.2.2 Medien und Antibiotika für Escherichia coli-Stämme ...................................................................... 29 3.3 Lösungen und Puffer ............................................................................................................................ 29 3.3.1 Lösungen für den Zellaufschluss ....................................................................................................... 29 3.3.2 Lösungen und Puffer für die ein- und zweidimensionale SDS-PAGE sowie für die Agarose- Gelelektrophorese .............................................................................................................................. 30 3.3.3 Lösungen und Puffer für die PF-2D-Anlage...................................................................................... 30
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Seite 13 und 14: Einleitung 7 Institut (RKI) übermi
Seite 15 und 16: Einleitung 9 MOMP bindet den Komple
Seite 17 und 18: Einleitung 11 Inzwischen sind über
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Seite 25 und 26: Einleitung 19 Weiterhin ist bekannt
Seite 27 und 28: Einleitung 21 Eine Legionella-Pilin
Seite 29 und 30: Einleitung 23 komplexen Strukturen,
Seite 31 und 32: Einleitung 25 Hier noch ein Hinweis
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Seite 37 und 38: Material 31 3.3.4 Lösungen für MA
Seite 39 und 40: Material 33 • Proteinpuffer: A: 2
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Seite 43 und 44: Methoden 37 4.3.1 Polyacrylamid-Gel
Seite 45 und 46: Methoden 39 4.3.4 Färben und Entf
Seite 47 und 48: Methoden 41 Der Gradient erstreckt
Seite 49 und 50: Methoden 43 • 12 Std. oder ü/N b
Seite 51 und 52: Methoden 45 Denaturierung, Anlageru
Seite 53 und 54:
Methoden 47 Verhältnis der Absorpt
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Methoden 49 • 0,8 µl dNTP-Mix (1
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Methoden 51 4.8 Aufreinigung rekomb
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Methoden 53 Flussgeschwindigkeit du
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Ergebnisse 57 Um keine Wachstumspha
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