Identifizierung und Charakterisierung von potentiellen ...

Ergebnisse 71
vom CsrA oder das YhbH σ 54 -Protein kommen in der flaR - -Mutante erkennbar vermehrt vor,
als dies im Wildtyp der Fall ist. Es konnte dabei nicht abschließend geklärt werden, welches
Protein im Peak dominiert. Beim ersten Versuch wurde direkt die flüssige Fraktion zur
Identifizierung herangezogen und das CsrA identifiziert. Im zweiten Ansatz ist die Fraktion
zunächst auf ein SDS-Gel aufgetragen worden. Dabei konnte die Bande des nur 7 kDa großen
CsrA-Proteins nicht ermittelt werden, stattdessen eine Bande der Größenordnung von etwa 22
kDa, die sich als das Modulatorprotein YhbH Sigma 54 herausstellte.
Beim Vergleich der in der zweiten Dimension nach Hydrophobizität aufgetrennten
Proteine vom Wildtyp und der fliA - -Mutante ist im Gegensatz zur flaR - -Mutante kein
eindeutiges, klares Auftrennungsbild herausgekommen. Insgesamt ist nur eine Fraktion
entdeckt worden, bei der ein charakteristischer Unterschied zu Tage getreten ist (s. Abb.
V.13). Oftmals sind die Auftrennungsläufe in ihrem optischen Erscheinungsbild trotz gleicher
Fraktionen zu unterschiedlich. Dabei ist schon berücksichtigt, dass es auch in der zweiten
Dimension, ähnlich der ersten, zu normalen Abweichungen, etwa in den Retentionszeiten
gleicher Proteine, kommen kann. In gewissem Maße lassen sich solche Chromatogramme
dennoch miteinander vergleichen, da sie sich programmintern durch eine „Stretchfunktion“ in
Annäherung bringen lassen. Diese Funktion ist auch bei nahezu allen Vergleichen zwischen
fliA - und Wildtyp angewandt worden.
Der markante Unterschied, der in der Abb. V.13 zu sehen ist, konnte nicht identifiziert
Abb. V.13 Vergleich der Auftrennungen vom Wildtyp (rot) und der fliA - -Mutante (schwarz) der Fraktion
13, IEP 6,9-7,2. Der markierte Peak der fliA - -Mutante wurde im Fraktionskollektor gesammelt und
nachträglich im SDS-Gel aufgetrennt. Die dort sichtbare Proteinbande konnte allerdings im MALDI-TOF-
Massenspektrometer nicht identifiziert werden. Die Chromatogramme sind wegen ungleicher
Retentionszeiten im machbaren Verhältnis zueinander gestreckt.