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Pre-print Volume - Posters VARIOUS TOPICS migrazione, il pattern proteico è stato analizzato tramite la tecnica del western-blot (Towbin, 1979) utizzando un antisiero monoclonale specifico per la Hsp70. L’analisi dei pesi molecolari e la densitometria sono state condotte con il software AlphaEaseFC. I dati di densitometria sono stati espressi come la media dei valori di tre differenti esperimenti e indicati come valore di densità integrata (IDV arbritary unit). 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 IDV arbritary unit. A c 200 Hz 300 Hz pinger *** Fig. 1 – A) Livelli di espressione di Hsp70 (% IDV) nelle cellule del sangue di Chromis chromis in funzione del disturbo acustico 200, 300 Hz e pinger dopo 2 ore di trattamento. I valori sono le medie ±SD di tre esperimenti separati. Valori significativi comparati ai controlli (***=p
Pre-print Volume - Posters VARIOUS TOPICS V. ARIZZA, F.T. GIARAMITA, D. PARRINELLO, M. VAZZANA, D. VICARI*, N. PARRINELLO Dip. di Biologia Animale “G. Reverberi”, Università di Palermo, Via Archirafi, 18 - 90123 Palermo, Italia. arizza@unipa.it *Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Sicilia “A. Mirri”, Via Gino Marinuzzi, 3 – Palermo, Italia. VARIAZIONI SESSO-DIPENDENTI NELL’ATTIVITÁ CITOTOSSICA DEI CELOMOCITI DI PARACENTROTUS LIVIDUS (ECHINOIDEA) SEX-DEPENDENT VARIATIONS IN THE CYTOTOXIC ACTIVITY OF PARACENTROTUS LIVIDUS (ECHINOIDEA) COELOMOCYTES Abstract – The coelomic fluid from the echinoderm contains several coelomocyte types involved in immune defences. In this article we report a study of some activity involved in immune response of the sea urchin Paracentrotus lividus. Correlative studies indicate that in this species a cytotoxic and hemoagglutinating activity is present in a manner sex-dependent. Key-words: immunity, coelomic fluid, sex. Introduzione - Alcuni studi effettuati sul sistema immunitario dei vertebrati fanno emergere una relazione tra sesso ed immunità, in generale le femmine sembrano possedere una maggiore reattività immunitaria rispetto ai maschi (Stoehr e Kokko, 2006). Tra gli invertebrati la situazione è molto meno chiara. Nel presente lavoro abbiamo studiato l’immuno-reattività di esemplari di entrambi i sessi dell’echinoderma Paracentrotus lividus esaminando alcune reazioni immunitarie di tipo umorale e cellulare. In particolare nella specie in esame recentemente è stata mostrata un’attività citotossica calcio–dipendente in grado di lisare gli eritrociti di coniglio e le cellule tumorali della linea K562 in seguito al rilascio di sostanze litiche ad opera degli sferulociti non colorati (S-CLS) (Arizza et al., 2007). Materiali e metodi – I saggi biologici sono stati condotti analizzando in totale campioni preparati singolarmente da 100 individui maschili e 100 femminili. È stata analizzata l’attività citotossica ed emoagglutinante del fluido celomatico (CF) e del supernatante del lisato degli S-CLS. Saggio di citotossicità: 200 µl di campione sono stati diluiti serialmente e miscelati con 200 µl di sospensione di eritrociti di coniglio (8×10 6 cell) in ISO-Ca 2+ (20 mM Tris, 0.5 M NaCl, 10 mM CaCl2 pH 7.5) e incubati per 1 ora a 37 °C. Il rilascio dell’emoglobina è stato determinato attraverso la lettura dell’assorbanza a 541 nm. Saggio di emoagglutinazione: 25 µl di campione sono stati diluiti serialmente in ISO-Ca 2+ e miscelati con 25 µl di sospensione eritrocitaria all’1% in ISO-Ca 2+ contenente gelatina allo 0,1% e incubati per 1 ora a 37 °C in piastre a 96 pozzetti con fondo a U (Microtiter-SIGMA). Risultati - Dai dati finora ottenuti si è potuto apprezzare, per la prima volta, che gli individui di P. lividus hanno una differente capacità immunitaria dipendente dal sesso. In particolare dal confronto dell’attività citotossica ed emoagglutinante esibita da individui maschili e femminili è emerso che queste ultime appaiono più immunoreattive rispetto ai maschi. Infatti l’attività citotossica del fluido celomatico (CF) della femmina risulta essere di circa il 65% in più alla massima concentrazione proteica rispetto a quella presentata dal maschio (Fig. 1a). Inoltre il lisato degli sferulociti non colorati S-CLS della femmina ha una capacità emolitica del 50 % circa 41 st S.I.B.M. CONGRESS Rapallo (GE), 7-11 June 2010 348
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