Métabolisme et fonctions des acides gras oméga-3 à longue chaîne ...

Matériels & Méthodes
V-4 Analyse des prostaglandines par GC-MS
Les échantillons ont été analysés par GC-MS en mode d’ionisation chimique négative
(NICI) afin d’obtenir une grande sensibilité de détection (de l’ordre du pg injecté). La colonne
capillaire DB17-MS utilisée à une longueur de 30m et un diamètre de 0,25µm. Elle est
recouverte intérieurement d’un film de phase stationnaire apolaire (phényl méthyl siloxane)
de 0,25µm d’épaisseur. Le gaz vecteur utilisé est l’hélium avec un débit de 1,2mL/min. Le
méthane est utilisé comme gaz réactant.
Les injections sont réalisées en mode split/splitless à 260°C. La température du four
est maintenue à 57°C pendant 2min puis elle augmente jusqu’à 180°C à raison de 20°C/min et
jusqu’à 280°C à raison de 4°C/min. Cette température est maintenue constante pendant
15min.
La température de la ligne de transfert entre la GC et la MS, la température à la source
de la MS, et celle du quadripôle sont respectivement fixées à 280°C, 150°C et 106°C. En
NICI, la fragmentation des prostaglandines dérivées sous forme d’esters
pentafluorobenzyliques conduit à la formation d’un seul ion à m/z : [M-181] - correspondant à
la perte du groupement PFB. Les ions m/z 522 et m/z 313 sont utilisés pour quantifier
respectivement la PGD 3 et la 15dPGJ 3 en mode de sélection d’ion (SIM).
VI- Protocole animal
VI-1 Animaux et régime alimentaire
Les expérimentations ont été réalisées sur des souris mâles CD1 « Swiss » (ICR,
Harlan France), âgées de 3 semaines et pesant 20g en moyenne. Les animaux avaient libre
accès à la nourriture (Aliment A03, SAFE, France) et à la boisson. Les animaux ont été
maintenus dans une animalerie en température et humidité contrôlées (25±1°C, 60-70%) avec
des cycles d’éclairage de 12 heures (lumière de 7h00 à 19h00). Préalablement aux
expérimentations, les animaux ont été habitués aux conditions de l’animalerie pendant au
minimum une semaine. Tous les protocoles expérimentaux ont été conduits en accord avec la
directive européenne du 24 novembre 1986 (86/609/EEC) et le décret du 19 avril 1988.
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