Métabolisme et fonctions des acides gras oméga-3 à longue chaîne ...

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Matériels & Méthodes V-4 Analyse des prostaglandines par GC-MS Les échantillons ont été analysés par GC-MS en mode d’ionisation chimique négative (NICI) afin d’obtenir une grande sensibilité de détection (de l’ordre du pg injecté). La colonne capillaire DB17-MS utilisée à une longueur de 30m et un diamètre de 0,25µm. Elle est recouverte intérieurement d’un film de phase stationnaire apolaire (phényl méthyl siloxane) de 0,25µm d’épaisseur. Le gaz vecteur utilisé est l’hélium avec un débit de 1,2mL/min. Le méthane est utilisé comme gaz réactant. Les injections sont réalisées en mode split/splitless à 260°C. La température du four est maintenue à 57°C pendant 2min puis elle augmente jusqu’à 180°C à raison de 20°C/min et jusqu’à 280°C à raison de 4°C/min. Cette température est maintenue constante pendant 15min. La température de la ligne de transfert entre la GC et la MS, la température à la source de la MS, et celle du quadripôle sont respectivement fixées à 280°C, 150°C et 106°C. En NICI, la fragmentation des prostaglandines dérivées sous forme d’esters pentafluorobenzyliques conduit à la formation d’un seul ion à m/z : [M-181] - correspondant à la perte du groupement PFB. Les ions m/z 522 et m/z 313 sont utilisés pour quantifier respectivement la PGD 3 et la 15dPGJ 3 en mode de sélection d’ion (SIM). VI- Protocole animal VI-1 Animaux et régime alimentaire Les expérimentations ont été réalisées sur des souris mâles CD1 « Swiss » (ICR, Harlan France), âgées de 3 semaines et pesant 20g en moyenne. Les animaux avaient libre accès à la nourriture (Aliment A03, SAFE, France) et à la boisson. Les animaux ont été maintenus dans une animalerie en température et humidité contrôlées (25±1°C, 60-70%) avec des cycles d’éclairage de 12 heures (lumière de 7h00 à 19h00). Préalablement aux expérimentations, les animaux ont été habitués aux conditions de l’animalerie pendant au minimum une semaine. Tous les protocoles expérimentaux ont été conduits en accord avec la directive européenne du 24 novembre 1986 (86/609/EEC) et le décret du 19 avril 1988. 77
Matériels & Méthodes Les souris ont été réparties en deux groupes. Le premier groupe a reçu une alimentation standard sous forme de croquettes contenant 5% de lipides ; ces animaux constituent le groupe contrôle. Le groupe expérimental a reçu une alimentation sous forme de poudre enrichie en DHA sous forme de triglycéride 0,5% (W/W), la quantité de lipides totaux étant ajustée à 5% avec de l’huile de tournesol. La préparation et le changement de nourriture sont effectués quotidiennement afin d’éviter l’oxydation des AGPI contenus dans la préparation. Nutriments standard (A03) DHA masse % Carbohydrates 51,7 52,2 Protéines 21,4 19,0 Lipides 5,0 5,0 Minéraux 5,7 6,6 Fibres 3,9 5,0 Humidité 12,2 12,0 Tableau 2A: Composition en nutriments du régime standard (A03) et du régime riche en DHA (DHA) Acides gras standard (A03) DHA mole % 16:0 22 5 16:1 2 tr 18:0 11 3 18:1 26 39 18:2 38 41 18:3 tr tr 22:6 nd 10 Tableau 2B: Composition en acides gras du régime standard (A03) et du régime riche en DHA (DHA). tr: trace. nd: non detecté. 78
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