Métabolisme et fonctions des acides gras oméga-3 à longue chaîne ...

Matériels & Méthodes
successifs. Les différents composés élués sont détectés en sortie de colonne grâce à un
détecteur à ionisation de flamme (FID) dont la température est fixée à 250°C. Les esters
méthyliques d’acides gras et les DMA (diméthylacétals) sont identifiés en comparant leur
temps de rétention avec celui de leurs standards correspondants connus et injectés dans les
mêmes conditions. Les fractions sont quantifiées grâce aux standards internes ajoutés en
quantité connue lors de l’extraction des lipides totaux.
Le même protocole a été utilisé pour l’analyse de l’incorporation des AGPI n-3 dans les
phospholipides des adipocytes 3T3-L1.
VI-4 Dosage des adipokines dans le plasma et les tissus adipeux
Les concentrations d’adiponectine et de leptine ont été mesurées dans le plasma des
souris en utilisant un kit Luminex (Millipore #MADPCYT-72K) selon les recommandations
du fabriquant.
Pour le dosage des adipokines tissulaires (adiponectine et leptine), 30mg de tissu
adipeux ont été broyés dans du tampon à pH7,4 (Tris-HCl 10mM, sucrose 250mM et
inhibiteurs de protéases) puis le mélange a été centrifugé 5min à 10 000t/min. La phase
intermédiaire est récupérée puis utilisée pour le dosage des adipokines avec les kits
précédemment décrits (cf. 3- Dosage des adipokines).
VII- Analyse statistique
Les résultats sont exprimés sous forme de moyenne ± SEM. La significativité a été
calculée au seuil de P