guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat
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3.4.2.4 Saggio <strong>di</strong> tossicità/genotossicità con Panagrellus re<strong>di</strong>vivus<br />
Principio<br />
Questo metodo intende valutare l’impatto d<strong>ei</strong> contaminanti contenuti in fase<br />
solida (<strong>su</strong>olo, se<strong>di</strong>menti, fanghi <strong>di</strong> depurazione, ecc.) <strong>su</strong>l nematode Panagrellus<br />
re<strong>di</strong>vivus, molto sensib<strong>il</strong>e negli screening <strong>di</strong> routine <strong>per</strong> la valutazione della<br />
contaminazione chimica acuta o cronica (Mclnnis, 1995).<br />
Organismi <strong>per</strong> <strong>il</strong> saggio<br />
Durante un <strong>per</strong>iodo <strong>di</strong> 96 ore, che rappresenta la durata della prova, <strong>il</strong><br />
nematode attraversa quattro sta<strong>di</strong> <strong>di</strong> crescita contrad<strong>di</strong>stinti da caratteristiche<br />
fisiologiche e <strong>di</strong>mensionali ben note (Samo<strong>il</strong>off et al., 1980).<br />
J2 250-350 micrometri<br />
J3 350-550 micrometri<br />
J4 550-750 micrometri<br />
A (adulto) 750-2000 micrometri<br />
In presenza <strong>di</strong> sostanze contaminanti ad effetto tossico, si assisterà all’arresto<br />
della crescita o alla morte dell’organismo. Me<strong>di</strong>ante <strong>il</strong> monitoraggio <strong>di</strong> un<br />
numero definito <strong>di</strong> in<strong>di</strong>vidui (circa 100) <strong>per</strong> un tempo <strong>di</strong> 96 ore, in presenza <strong>di</strong><br />
concentrazioni <strong>di</strong>verse della matrice ambientale, è possib<strong>il</strong>e valutare gli effetti<br />
letali e/o <strong>su</strong>bletali. In particolare, <strong>il</strong> numero <strong>di</strong> in<strong>di</strong>vidui morti fornisce<br />
un’in<strong>di</strong>cazione <strong>su</strong>ll’effetto letale (tossicità acuta), mentre <strong>il</strong> numero <strong>di</strong> organismi<br />
ai vari sta<strong>di</strong> <strong>di</strong> crescita (J2, J3, J4) consente <strong>di</strong> stimare gli effetti <strong>su</strong>bletali<br />
(tossicità cronica).<br />
La crescita del nematode dallo sta<strong>di</strong>o J2 a J3 o J4 prevede l’espressione <strong>di</strong> un<br />
numero limitato <strong>di</strong> geni. Invece, la crescita dallo sta<strong>di</strong>o J4 allo sta<strong>di</strong>o adulto,<br />
richiede l’intervento <strong>di</strong> un numero cospicuo <strong>di</strong> geni. Molti mutageni conosciuti<br />
possono inibire selettivamente <strong>il</strong> passaggio da J4 ad adulto, e quest’inibizione <strong>di</strong><br />
crescita può essere ut<strong>il</strong>izzata come un’in<strong>di</strong>cazione del potenziale<br />
mutagenetico/genotossico del campione (Samo<strong>il</strong>off, 1990).<br />
Materiali<br />
- Provette da campionamento (2,5 mL con fondo piatto) e co<strong>per</strong>chi;<br />
- portaprovette (10 provette <strong>per</strong> ognuno);<br />
- micro pipette Pasteur;<br />
- pipette ammorbi<strong>di</strong>te al fondo con <strong>il</strong> calore in modo da ottenere l’<br />
estremità lunga e sott<strong>il</strong>e;<br />
- tappi <strong>di</strong> gomma;<br />
- cap<strong>su</strong>le Petri in vetro;<br />
- mini setaccio;<br />
- rete da 12 micron, Nitex 3 100% Nylon Polyammide;<br />
- pipette;<br />
- porta pipette;<br />
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