guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

3.5.2 SOS Chromotest
Principio del metodo
Le lesioni al DNA attivano normalmente dei meccanismi di riparazione, indicati
complessivamente come risposta SOS. Il SOS Chromotest fornisce una
indicazione quantitativa dell'entità dell'attivazione di questi meccanismi.
Il saggio si basa sull'utilizzo di un microrganismo (Escherichia coli PQ 37) nel
quale il promotore di uno dei principali geni (Sfi A) coinvolti nella risposta SOS è
stato posto a monte del gene della β- galattosidasi.
Il livello di β- galattosidasi viene quindi dosato spettrofotometricamente. In
parallelo viene monitorata l'attività della fosfatasi alcalina, che fornisce
indicazioni sulla tossicità del campione in esame ed elimina la possibilità di
fornire risultati falsi negativi.
Materiali di consumo e strumentazione
Terreni e reattivi
L-Medium
Triptone 10 g/L
Estratto di lievito 5 g/L
NaCl 10 g/L
LA-Medium
L-MEDIUM con aggiunta di 20 µl /mL di ampicillina
B BUFFER (β galattosidasi)
Na2HPO4 16.1 g/L
NaH2PO4 5.5 g/L
KCl 0.75 g/L
MgSO4 x7 H2O 0.25 g/L
SDS 1 g/L
Portare a pH 7;
aggiungere β mercaptoetanolo 2.7 mL/L.
P Buffer (fosfatasi alcalina)
Tris 121 g/L
SDS 1 g/L
Portare a pH 8.8.
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