guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

Questi piccoli J2 raccolti devono essere trasferiti nelle provette da 2,5 mL con il
fondo piatto. Questo trasferimento richiede l’uso di micropipette.
Usando le micropipette, 10 piccoli J2 sono prelevati dalla piastra e posti in una
provetta controllo. Per evitare che i nematodi si secchino, occorre prelevare una
riga di 10 provette alla volta. Con la pratica 10 piccoli possono essere prelevati
con meno di 5 microlitri di tampone M9. È molto importante non utilizzare un
eccesso di tampone M9 per il trasferimento dei nematodi in quanto un volume
in eccesso diluisce il campione da saggiare e se il volume della provetta
controllo eccede i 0,5 mL, i nematodi muoiono per mancanza di ossigeno.
Ad ognuna delle 10 provette nella prima fila viene aggiunto 0,5 mL di un
controllo negativo M9Y . In ogni provetta della fila seguente è aggiunto 0,6 mL
del campione preparato. Così, ogni fila di 10 vaschette avrà un totale di 100
nematodi e un volume totale di campione di 5 mL.
Si coprono le provette e i nematodi vengono fatti crescere per un periodo di 96
ore ad una temperatura tra 19-25 °C.
Dopo il periodo di crescita di 96 ore, le provette sono riaperte e viene contato il
numero di sopravvissuti e la lunghezza di ognuno.
Per misurare la lunghezza dei nematodi è necessario uno stereo-microscopio
con un ingrandimento di 10 X e oculari regolabili 10X21 con una griglia di 100 x
1 mm 2 .
Per registrare più facilmente la differente grandezza dei nematodi, ci si può
concentrare su una taglia per volta, cominciando con gli adulti di 750 μm, poi
con i J3 di 350 μm e poi in ultimo i J4.
I nematodi, se necessario, possono essere soppressi per facilitarne la
misurazione. Dopo avere contato i sopravvissuti, la vaschetta può essere
immersa parzialmente in acqua calda (60 °C) per circa 10 secondi, tutti i
nematodi sopravvissuti saranno raddrizzati e uccisi. Ciò renderà più facile
misurarne la differente lunghezza, ma comporta un aumento del tempo per
completare il saggio. Con la pratica, i nematodi potranno essere misurati ancora
vivi.
Calcoli
Sopravvivenza
La sopravvivenza è il rapporto percentuale tra i sopravvissuti nel campione e i
sopravvissuti nel controllo:
S= numero di sopravvissuti
Sopravvivenza = %
S campione
S controllo
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