guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

3.3.2 Saggio di tossicità con Vibrio fischeri
Principio del metodo
Viene valutata la tossicità acuta di un campione acquoso, tal quale o diluito,
verificando, mediante lumenometro, l’inibizione della bioluminescenza
naturalmente emessa da una popolazione monospecifica di cellule di batteri
Gram-negativi appartenenti alla specie Vibrio fischeri, dopo un tempo di
contatto di 15 e 30 minuti con il campione in esame, tal quale o diluito.
Il metodo consente la verifica della tossicità di campioni acquosi, esprimendo i
risultati come inibizione percentuale (I%) e/o come concentrazione efficace ad
indurre un'inibizione della bioluminescenza pari al 50% (EC50).
Il metodo si applica a matrici acquose e ad estratti acquosi di matrici solide.
Materiali, reagenti e apparecchiature
- Luminometro con cella di misura termostatata a 15 ± 1°C e blocco
termostatico a 15 ± 1°C;
- congelatore a temperatura inferiore a –18° C;
- micropipette (da 50 mL a 2.000 mL);
- pipette graduate tarate (1-2-5-10 mL);
- cuvette di misura, adatte al luminometro in uso, di materiale
chimicamente inerte;
- cuvette di misura a doppia camera, adatte al luminometro in uso, di
materiale chimicamente inerte;
- ceppo batterico: Vibrio fischeri NRRL B-11177, disponibile
-
commercialmente allo stato liofilo e congelato;
soluzione ricostituente tale da garantire una concentrazione salina finale
della sospensione batterica del 2% (sotto forma di NaCl);
- soluzione diluente/controllo: soluzione di NaCl al 2% in acqua distillata o
ultrapura;
- pipette Pasteur;
- 3,5-diclorofenolo (C6H4Cl2O);
- solfato di zinco eptaidrato (ZnSO4 · 7 H2O);
- cloruro di sodio (NaCl) di grado analitico;
- acqua distillata o ultrapura (acqua con una conducibilità inferiore a 1 µS
cm -1 ).
Conservazione e preparazione del campione
Conservare il campione a 4°C ± 3 per non più di 72 ore dal prelievo.
Effettuare la correzione osmotica del campione solubilizzando in un'aliquota di
esso una quantità di NaCl pari al 2 ± 0,2 %.
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