guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

Validazione dei saggi
Per ogni sospensione batterica, si procede alla validazione dei saggi mediante
verifica dell’effetto di inibizione della bioluminescenza a 15 minuti, indotta da
una soluzione di 3,5-diclorofenolo alla concentrazione finale in cuvetta di 6
mg/L.
Ogni saggio si ritiene validato quando a 15 minuti la percentuale di inibizione
della bioluminescenza, indotta dalla soluzione di 3,5-diclorofenolo alla
concentrazione di 6 mg/L, risulta ≥ 50 %
Il fattore di correzione ƒkt deve essere compreso fra 0,7 e 1,4.
Le percentuali di inibizione fra le repliche non devono variare dal loro valore
medio di ± 3.
Le curve di regressione lineare sono considerate accettabili se presentano r 2 >
0.9.
Validazione lotti dei batteri bioluminescenti
Soluzione di riferimento di 3,5-diclorofenolo
Preparare una soluzione di 3,5-diclorofenolo alla concentrazione di 12 mg/L in
una soluzione di NaCl al 2% in acqua distillata o ultrapura.
A partire da questa soluzione, allestire successive diluizioni ed effettuare la
determinazione della EC50 con saggio definitivo.
Soluzione di riferimento di ZnSO4 · 7H2O espressa come Zn II
Preparare una soluzione di ZnSO4 · 7H2O alla concentrazione di 10 mg/L,
espresso come Zn II in una soluzione di NaCl al 2% in acqua distillata o
ultrapura.
A partire da questa soluzione, allestire successive diluizioni ed effettuare la
determinazione della EC50 con saggio definitivo.
Criteri di validazione
Il valore di EC50 a 15 minuti deve essere inferiore a 6 mg/L 3,5-diclorofenolo.
Il valore di EC50 a 15 minuti deve essere inferiore a 3 mg/L Zn II .
APPENDICE: Interferenza di colore e/o torbidità sulla bioluminescenza
Nel caso in cui la EC50 sia calcolata su campioni torbidi o colorati, è opportuno
valutare l’interferenza del colore e/o della torbidità sulla bioluminescenza,
mediante cuvetta a doppia camera e/o correzione strumentale automatica.
Se viene utilizzata la cuvetta a doppia camera, si procede secondo il seguente
schema:
- utilizzare una diluizione del campione (C≈EC50) prossima alla EC50
precedentemente determinata, mantenendola a 15 ± 1°C;
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