guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

- porre nella camera esterna 1 mL della soluzione di controllo;
- porre nella camera interna della cuvetta, mediante pipetta Pasteur, la
sospensione batterica raggiungendo lo stesso livello della soluzione di
controllo;
- incubare almeno 15 minuti a 15 ± 1°C;
- mantenere la posizione della cuvetta invariata durante tutte le successive
misurazioni;
- misurare la luminescenza emessa dai batteri (B0);
- sostituire nella camera esterna la soluzione di controllo con 1 mL del
campione da saggiare;
- misurare la luminescenza batterica (I 5) dopo 5 minuti dalla lettura di B0;
- con una pipetta Pasteur sostituire nella camera esterna il campione con
1 mL di soluzione di controllo;
- dopo altri 5 minuti, effettuare la lettura della luminescenza batterica (B10);
- si considerano significative le inibizioni della luminescenza superiori al
10%, mentre inibizioni superiori al 50% impediscono una corretta
elaborazione dei risultati.
Calcolo in accordo alla legge di Lambert-Beer:
- calcolare B5:
B
5
=
B
0
- calcolare la percentuale di inibizione della luminescenza (I%) secondo
la seguente formula.
I % =
−
2
B5 – I 5
B5
B
·100
- procedere nel calcolo se l’inibizione della luminescenza (I%) è
compresa tra 10 e 50;
- calcolare l'assorbanza Ac alla concentrazione (C) di campione di cui si
debba correggere il valore Γ,
dove
C B5
Ac = · 3,1 · ln
C≈EC50
I 5
C≈EC50 è la concentrazione saggiata del campione,
C è ogni concentrazione da correggere,
k è una costante empiricamente derivata (k = 3,1) applicabile sia per
Microtox sia per Lumistox;
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