guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

Condizioni di incubazione
Le condizioni di incubazione sono le seguenti:
- temperatura 20-25°C;
- illuminazione con lampade fluorescenti tipo “cool white” con intensità luminosa
superiore a 4.300 lux e ritmo giorno-notte (ovvero 16 ore di luce alternate con
8 ore di buio);
- eventuale oscillazione continua a 100 rpm.
Il pH deve essere inferiore a 8,5 per garantire la disponibilità della CO2.
Se la cella climatica o il frigotermostato dove sono disposte le colture algali non
presentano ricambi d’aria naturali, è consigliabile immettere aria mediante una
pompa a membrana (del tipo utilizzato per gli acquari).
Per evitare un effetto limitante dovuto alla CO2, è necessario garantire
un’adeguata superficie di scambio tra il terreno di coltura e l’aria, perciò si
raccomanda di agitare le colture algali e di non occupare un volume superiore
al 20-30% rispetto al volume totale della beuta (25 mL di coltura in beuta da 125
mL).
Tale rapporto deve essere mantenuto quando questa viene agitata
manualmente una volta al giorno; in condizione di agitazione continua,
mediante piano oscillante o rotante, la percentuale di volume occupato dalla
coltura può, invece, raggiungere il 50%.
Colture algali su terreno liquido
Allestire una prima coltura algale in terreno liquido, partendo dal ceppo
conservato generalmente su terreno solido, trasferendo con ansa sterile parte
della patina di alghe in beuta da 250 mL contenente una quantità idonea di
terreno di coltura (50 mL). La coltura deve essere mantenuta in frigotermostato
o cella climatica garantendo, in assenza di piano oscillante o rotante, almeno
una agitazione manuale al giorno.
Settimanalmente, le colture algali devono essere rinnovate, immettendo in
condizioni asettiche 2 mL della coltura vecchia di una settimana in una nuova
beuta contenente 50-75 mL di terreno; è buona regola mantenere la vecchia
coltura per una ulteriore settimana in modo da avere sempre a disposizione due
cloni algali. I trapianti ogni sette giorni garantiscono la disponibilità di cellule
algali in fase esponenziale di crescita.
Colture algali su terreno agarizzato
È conveniente allestire colture algali su terreno agarizzato per assicurarsi una
riserva di alghe vitali nei casi in cui sia necessario rinnovare le colture su
terreno liquido compromesse da agenti biologici (batteri, funghi, protozoi ciliati e
flagellati, altre specie di alghe) o da sostanze tossiche che casualmente
possono contaminare la coltura madre. A tal fine, utilizzare il terreno di
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