guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

contenenti il controllo verranno denominate con la sigla K ed anch’esse
numerate da 1 a 3.
Aggiunta dell’inoculo
Ad ogni beuta viene aggiunto l’inoculo algale. La sospensione algale
dell’inoculo deve essere preparata 24 ore prima dell’inizio del saggio. La
concentrazione iniziale di ciascuna coltura algale sarà di 1 . 10 3 cellule/mL.
Incubazione delle beute
Dopo aver aggiunto l’inoculo, le beute vengono chiuse con il foglio di alluminio
che già le racchiudeva durante la sterilizzazione, la chiusura deve comunque
permettere un sufficiente scambio di gas all’interno delle beute e non ostacolare
l’illuminazione. Successivamente le beute vengono disposte in cella climatica o
frigo-termostato a 20-25°C, sottoposte ad illuminazione continua con intensità
luminosa non inferiore a 4300 lux e ad agitazione continua (in alternativa è
possibile agitare le beute manualmente almeno per due volte il giorno).
Misura della crescita algale
Dopo 72 o 96 ore di incubazione, in ogni beuta verrà misurata la crescita algale
mediante uno dei sistemi di misura riportati in precedenza. Il risultato
rappresenta la crescita algale rilevata alla 72ª o 96ª ora: CA (72h) e CA (96h).
Da ogni beuta si ottiene un valore di CA, da ogni gruppo di beute (3 repliche) si
ottiene il valore medio della CA e gli altri parametri statistici previsti.
Micrometodo
La prova di crescita algale può essere eseguita su piastre in materiale plastico
monouso da 24 pozzetti, ciascun pozzetto dovrà avere un volume minimo di 2,5
mL.
Ferme restando tutte le condizioni ambientale per l’esecuzione della prova
dovranno essere apportate le seguenti modifiche:
- Concentrazione dell’inoculo algale:1000X10 3 /mL;
- Concentrazione iniziale di ciascuna coltura algale: 10 x . 10 3 cellule/mL;
- lettura della CA: dopo 72 ore dall’inizio della prova.
Criteri di validazione
La prova deve essere considerata valida se sono rispettate le seguenti
condizioni:
1. dopo 72 ore di incubazione la densità cellulare iniziale nella soluzione di
controllo deve aumentare di un fattore non inferiore a 16;
2. le densità cellulari delle repliche della soluzione di controllo non devono
differire oltre il valore del 20%;
3. il pH non deve subire una variazione superiore a 1,5 unità durante la
durata della prova.
48