guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

Allo scopo possono essere utilizzate le camere di Burker o altre camere di
conta equivalenti predisposte per il conteggio degli elementi figurati del sangue.
Il reticolo della camera di Burker è costituito da 9 quadrati grandi, ognuno della
superficie di 1 mm 2 , ognuno di questi quadrati è a sua volta suddiviso in 16
quadrati con superficie unitaria di 1/25 mm 2 .
Per il conteggio delle cellule algali si depone una goccia della sospensione tra
la camera ed il coprioggetti che vi deve aderire perfettamente. Dopo aver atteso
circa un minuto, necessario alle alghe per depositarsi sulla camera, si esegue il
conteggio al microscopio. A tal fine si conteggiano le cellule presenti in un
quadrato grande delimitato dalla linea esterna delle tre linee ravvicinate; il
numero di cellule conteggiate deve essere moltiplicato per 10 per ottenere il
valore della densità algale espresso come numero di cellule . 10 3 /mL.
Determinazioni più precise possono essere ottenute da un valore medio di
cellule conteggiate su un numero maggiore di quadrati grandi.
Determinazione della clorofilla-a mediante fluorescenza
La determinazione della clorofilla presente nelle cellule algali è in grado di
fornire una stima del numero di cellule e della biomassa prodotta.
La misura della clorofilla-a può essere eseguita sia in vitro sia in vivo, mediante
misure spettrofotometriche o fluorimetriche; si ritiene opportuno segnalare il
sistema di misura in vivo poiché risulta sensibile, veloce e non distruttivo
rispetto alla coltura algale.
Utilizzare un fluorimetro con la lunghezza d’onda di eccitazione impostata a 430
nm e la lunghezza d’onda di lettura impostata a 663 nm. Eseguire la lettura del
bianco con acqua distillata; agitare accuratamente la coltura algale e deporne
circa 5 mL all’interno di una cuvetta da fluorimetria in vetro o plastica; eseguire
rapidamente la lettura e registrare il dato strumentale. È importante tuttavia
tenere presente che il rapporto tra clorofilla-a e massa cellulare può variare in
relazione alla crescita algale in acque naturali con diversa composizione
chimica, ed inoltre che sostanze chimiche presenti nel campione possono
interferire nella determinazione fluorimetrica (US-EPA, 1978).
Analisi statistica dei dati
Espressione dei dati relativi alla crescita algale e numero di
replicati
In riferimento a quanto riportato nei sistemi di misura di crescita algale, si
ricorda che la crescita algale viene espressa come densità cellulare (numero di
cellule . 10 3 /mL).
Ogni diluizione utilizzata nel saggio di tossicità e i rispettivi controlli dovrebbero
essere distribuiti su 5 repliche. Nei casi in cui, per motivi di spazio o per scarsa
quantità di campione, è necessario diminuire il numero delle beute allora è
possibile ridurre il numero delle repliche sino a 3. Il piano sperimentale basato
su 3 replicati rappresenta la dotazione minima per un’elaborazione statistica dei
dati.
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