guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

Densità cellulare
La misura della crescita algale mediante il conteggio cellulare rappresenta un
metodo semplice e sensibile; a tal fine è possibile utilizzare contaglobuli
elettronici oppure il conteggio diretto mediante lettura microscopica.
Nel caso in cui la crescita algale venga determinata con sistemi diversi dal
conteggio cellulare (fluorimetria, spettrofotometria), la densità cellulare può
essere determinata indirettamente mediante l’uso di un Fattore di Conversione
in Densità cellulare (FCD). Il fattore di conversione FCD deve essere calcolato
mediante il sistema della regressione lineare tra conteggi cellulari e le altre
misure strumentali.
Conteggio cellulare mediante contaglobuli
Disporre di una soluzione elettrolitica costituita da NaCl 1% filtrata su
membrane da 0,22 µm (si suggerisce di prepararne 2 litri alla volta, utilizzando
NaCl di grado analitico e acqua distillata; utilizzare la soluzione tramite un
dispensatore di capacità adeguata con sistema di distribuzione regolabile). La
conducibilità elettrica della soluzione è determinante per il corretto
funzionamento del contaglobuli. La sospensione algale deve essere diluita con
la soluzione di NaCl con un rapporto di almeno 1:5; sospensioni algali con
densità elevata richiederanno diluizioni superiori (1:10, 1:50).
La sospensione diluita passa attraverso un foro di 100 µm di diametro; ogni
cellula che attraversa il foro determina una caduta di potenziale proporzionale al
volume di soluzione elettrolitica spostato; la caduta di potenziale viene
evidenziata come segnale strumentale e registrata. Utilizzando contaglobuli
dedicati all’ematologia, le cellule di R. subcapitata possono essere determinate
nel canale dedicato ai leucociti; nei contaglobuli più versatili è opportuno
impostare i parametri di lavoro dello strumento (amplificazione del segnale,
discriminatore, corrente di fondo, finestra di lettura) nella combinazione più
idonea alla determinazione delle cellule algali in questione.
Si ricorda che R. subcapitata può presentare una certa variabilità dimensionale,
per cui è opportuno monitorare l’accuratezza della risposta del contaglobuli
mediante taratura con soluzioni a densità algale nota e determinata con altra
tecnica (ad esempio il conteggio al microscopio).
Conteggio cellulare mediante lettura microscopica
Il numero di cellule algali può essere determinato mediante l’osservazione
microscopica.
È necessario disporre di camere per il conteggio microscopico che sono
costituite da lastre di vetro rettangolari contenenti un alloggiamento sul quale é
disegnato un fine reticolo di riferimento, sulla camera deve essere applicato un
vetrino coprioggetti di spessore adeguato per sostenere la pressione di due
linguette in metallo che hanno il compito di mantenerlo aderente al portaoggetti.
La perfetta aderenza del vetrino coprioggetti alla camera è indispensabile per la
precisione del conteggio, condizionando le dimensioni della camera stessa.
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