guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

Procedimento
Riattivazione e preparazione della sospensione batterica
I ceppi batterici, preparati commercialmente, devono essere riattivati prima
dell’uso, con la soluzione ricostituente (1 mL per i ceppi utilizzati con il sistema
Microtox; 1,2 mL per i ceppi utilizzati con il sistema Lumistox).
Preparazione della sospensione batterica d'uso per il saggio preliminare e
definitivo:
- ceppi batterici del sistema Microtox: la sospensione batterica riattivata deve
essere diluita 1:5 con la soluzione diluente;
- ceppi batterici del sistema Lumistox: non sono necessarie ulteriori diluizioni.
La sospensione batterica deve essere utilizzata nell’intervallo temporale 15
minuti - 5 ore e conservata alla temperatura di 4 ± 3 °C.
Nota: I ceppi batterici ricostituiti possono essere ricongelati e utilizzati successivamente solo per
l'esecuzione del saggio preliminare.
Determinazione dell'Inibizione percentuale (I%) - saggio preliminare
Esecuzione del saggio
Al fine di conoscere l' I% indotta dal campione in esame ed il suo grado di
tossicità lo si saggia al 100%, secondo il seguente schema:
- incubare la sospensione batterica per 15 minuti a 15 ± 1 °C;
- preparare una serie di cuvette con 1-3 mL di soluzione di controllo e delle
due concentrazioni dei campioni in esame;
- preparare una cuvetta con la sostanza di riferimento (3,5-diclorofenolo
alla concentrazione di 6 mg/L), per la validazione del saggio;
- incubare 15 minuti a 15 ± 1 °C;
- porre a contatto 50 µL di sospensione batterica con 1 mL della soluzione
di controllo e di campione;
- incubare per 15 e/o 30 minuti a 15 ± 1 °C;
- effettuare la lettura della luminescenza emessa.
Determinazione dell'Inibizione percentuale (I %)
La percentuale di inibizione della luminescenza (I %) viene calcolata secondo
la formula:
I %=
I b- I
c
I b
Dove
I c = luminosità del campione
I b = luminosità della soluzione di controllo
x 100
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