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guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

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Conteggio delle cellule algali della sospensione<br />

Dopo 24 ore <strong>di</strong> incubazione determinare la concentrazione <strong>di</strong> cellule presenti<br />

nella sospensione algale me<strong>di</strong>ante conteggio eseguib<strong>il</strong>e con contaglobuli<br />

elettronico o camera <strong>di</strong> Burker ( o camera <strong>di</strong> conta equivalente).<br />

D<strong>il</strong>uizione della sospensione algale<br />

D<strong>il</strong>uire la sospensione algale <strong>per</strong> ottenere un inoculo contenente 100 . 10 3<br />

cellule/mL.<br />

A tal fine, si riporta un esempio <strong>di</strong> calcolo <strong>per</strong> la <strong>di</strong>luizione.<br />

A B D<br />

Volume totale<br />

inoculo (mL)<br />

X Densità inoculo<br />

10 x 10 4 cellule/mL<br />

C<br />

Densità della sospensione algale (cellule/mL)<br />

Dove:<br />

=<br />

Volume della sospensione<br />

algale da prelevare <strong>per</strong><br />

l’inoculo (mL)<br />

A E F<br />

Volume totale<br />

inoculo (mL)<br />

=<br />

n. beute previste<br />

<strong>per</strong> <strong>il</strong> saggio<br />

x<br />

0,25 (volume inoculo)<br />

(mL)<br />

Il Volume della sospensione algale da prelevare <strong>per</strong> l’inoculo (D) deve essere<br />

portato, me<strong>di</strong>ante aggiunta <strong>di</strong> acqua ultrapura, al pari del Volume totale<br />

dell’inoculo (A), a <strong>su</strong>a volta determinato dal prodotto tra <strong>il</strong> numero <strong>di</strong> beute da<br />

impiegare nel saggio (E) e <strong>il</strong> volume dell’inoculo (F).<br />

Distribuzione dell’inoculo nelle beute del saggio<br />

In ogni beuta del saggio aggiungere un inoculo costituito da 0,25 mL della<br />

sospensione algale con densità <strong>di</strong> 100 . 10 3 cellule/mL avendo cura <strong>di</strong> prelevare<br />

sempre lo stesso volume della sospensione mantenuta omogenea me<strong>di</strong>ante<br />

<strong>per</strong>io<strong>di</strong>ca agitazione. Ogni beuta conterrà un volume finale <strong>di</strong> 25 mL, <strong>di</strong><br />

conseguenza la densità algale <strong>di</strong> partenza all’inizio del saggio sarà <strong>di</strong> 1 . 10 3<br />

cellule/mL.<br />

Sistemi <strong>di</strong> mi<strong>su</strong>ra della crescita algale<br />

Crescita Algale alla 96ª ora e crescita algale alla 72ª ora<br />

I parametri ut<strong>il</strong>izzati <strong>per</strong> descrivere la crescita algale sono la mi<strong>su</strong>ra della<br />

crescita algale alla 72ª o 96ª ora <strong>di</strong> incubazione. Sono in<strong>di</strong>cati rispettivamente<br />

con CA (72h) e CA (96h), e rappresentano la mi<strong>su</strong>ra della Massima Velocità <strong>di</strong><br />

Crescita (MVC) in rapporto ad un <strong>per</strong>iodo <strong>di</strong> 72 o 96 ore e ed esprimono la<br />

crescita algale come densità cellulare (numero <strong>di</strong> cellule . 10 3 /mL).<br />

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