guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

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- calcolare l’ EC50 mediante il metodo di analisi dei probits. L’intervallo di accettabilità EC50 24h per il bicromato di potassio è compreso tra 0.6 ÷ 2.1 mg/L. APPENDICE 2: Saggio di tossicità acuta con Daphnia Magna Strass con DaphtoxKit F magna In alternativa ai daphnidi provenenti dall’allevamento, per il saggio di tossicità acuta si possono utilizzare giovani Daphnie proveniente da forme criptobiotiche DaphtoxKit F magna secondo quanto riportato di seguito Schiusa degli efippi Prendere una vial di efippi e versarla nel colino in dotazione con il kit; risciacquare diverse volte sotto acqua corrente (con getto non molto forte); - trasferire gli efippi in una piastra Petri di diametro 100 mm con 50 mL di acqua standard areata aiutandosi, eventualmente, con una spruzzetta o una pipetta per far passare tutti gli efippi contenuti nella vial alla piastra; - chiudere la piastra e mettere ad incubare a 6.000-8.000 lux di luce continua ed alla temperatura di 21 ± 1 °C; - attendere la schiusa degli efippi per 72 – 90 ore non superando però questi tempi per l’allestimento del saggio. Nota: registrare i valori di temperatura e di lux se monitorati durante la schiusa. Allestimento del saggio - Preparare la piastra monopozzetto in dotazione con il kit, costituita da 30 pozzetti da 10 mL ciascuno. La riga X è utilizzata per la repliche del controllo; le righe numerate da 1 a 5 sono usate per le diverse diluizioni del campione, partendo dal campione più diluito; - riempire i 5 pozzetti della riga X, ciascuno con 10 mL di acqua standard e i 5 pozzetti delle righe numerate da 1 a 5, ciascuno con 10 mL delle diluizioni del campione, partendo dal più diluito fino al più concentrato; - trasferire 20 daphnidi dalla piastra Petri in ciascuno dei pozzetti della prima colonna di sinistra, partendo dalla riga X (controllo) e proseguendo con le righe da 1 a 5; di seguito, si trasferiscono per ogni riga (partendo sempre dalla X) 5 daphnidi in ognuno dei 4 pozzetti rimasti, prelevandoli dal pozzetto di sinistra (per agevolare questa operazione si può collocare un foglio scuro, sotto la piastra, per aumentare il contrasto) evitando di trasferire liquido per non diluire il campione; - al termine del trasferimento si registra l’ora e si colloca sopra la piastra multipozzetto il foglio di parafilm e il coperchio. Queste operazioni vanno compiute evitando brusche manovre che potrebbero imprigionare gli organismi sul foglio o sulla superficie dell’acqua; - trasferire la piastra a 21 ± 1 °C. Nota: registrare i valori di temperatura se monitorati durante la schiusa. 38
Riferimenti bibliografici CNR - I.R.S.A. 1994. Quaderni, 100. C.M. Blundo, L.Campanella. S.Capri, T. La Noce, A.Liberatori, R.Pagnotta e M.Pettine. Gorbi G., 1987. Utilizzazione di Daphnia magna in tossicologia ambientale. 7- 36, Atti del corso di formazione. CISBA. ISO 5667-2, 1991. Qualité de l’eau – Échantillonnage – Partie 2: Guide général sur les techniques d’échantillonnage. ISO 5725-2, 1994. Exactitude (justesse et fidélité) des résultats et méthodes de mesure – Partie 2: Méthode de base pour la détermination de la répétabilité et de la reproductibilité d’une méthode demesure normalisée. Puddu A., 1989. Programma di calcolo per l’elaborazione dei risultati di un saggio di tossicità mediante analisi dei probits. Metodi analitici per le acque. Notiziario CNR-IRSA 2:19-37. Sbalchiero A., Ruco D., 2002. Daphnia magna Straus: test di tossicità acuta secondo il protocollo ISO EN UNI 6341. UNI EN ISO 6341, 1999. Qualità dell’acqua - Determinazione dell’inibizione della mobilità della Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea ) - Prova della Tossicità acuta. UNI EN 25814:1994. Qualità dell’acqua. Determinazione dell’ossigeno disciolto. Metodo elettrochimico a sonda. 39
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