guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

- calcolare l’ EC50 mediante il metodo di analisi dei probits. L’intervallo di
accettabilità EC50 24h per il bicromato di potassio è compreso tra 0.6
÷ 2.1 mg/L.
APPENDICE 2: Saggio di tossicità acuta con Daphnia Magna Strass con
DaphtoxKit F magna
In alternativa ai daphnidi provenenti dall’allevamento, per il saggio di tossicità
acuta si possono utilizzare giovani Daphnie proveniente da forme criptobiotiche
DaphtoxKit F magna secondo quanto riportato di seguito
Schiusa degli efippi
Prendere una vial di efippi e versarla nel colino in dotazione con il kit;
risciacquare diverse volte sotto acqua corrente (con getto non molto forte);
- trasferire gli efippi in una piastra Petri di diametro 100 mm con 50 mL di
acqua standard areata aiutandosi, eventualmente, con una spruzzetta o
una pipetta per far passare tutti gli efippi contenuti nella vial alla piastra;
- chiudere la piastra e mettere ad incubare a 6.000-8.000 lux di luce
continua ed alla temperatura di 21 ± 1 °C;
- attendere la schiusa degli efippi per 72 – 90 ore non superando però
questi tempi per l’allestimento del saggio.
Nota: registrare i valori di temperatura e di lux se monitorati durante la schiusa.
Allestimento del saggio
- Preparare la piastra monopozzetto in dotazione con il kit, costituita da 30
pozzetti da 10 mL ciascuno. La riga X è utilizzata per la repliche del
controllo; le righe numerate da 1 a 5 sono usate per le diverse diluizioni
del campione, partendo dal campione più diluito;
- riempire i 5 pozzetti della riga X, ciascuno con 10 mL di acqua standard
e i 5 pozzetti delle righe numerate da 1 a 5, ciascuno con 10 mL delle
diluizioni del campione, partendo dal più diluito fino al più concentrato;
- trasferire 20 daphnidi dalla piastra Petri in ciascuno dei pozzetti della
prima colonna di sinistra, partendo dalla riga X (controllo) e proseguendo
con le righe da 1 a 5; di seguito, si trasferiscono per ogni riga (partendo
sempre dalla X) 5 daphnidi in ognuno dei 4 pozzetti rimasti, prelevandoli
dal pozzetto di sinistra (per agevolare questa operazione si può collocare
un foglio scuro, sotto la piastra, per aumentare il contrasto) evitando di
trasferire liquido per non diluire il campione;
- al termine del trasferimento si registra l’ora e si colloca sopra la piastra
multipozzetto il foglio di parafilm e il coperchio. Queste operazioni vanno
compiute evitando brusche manovre che potrebbero imprigionare gli
organismi sul foglio o sulla superficie dell’acqua;
- trasferire la piastra a 21 ± 1 °C.
Nota: registrare i valori di temperatura se monitorati durante la schiusa.
38