guida tecnica su metodi di analisi per il suolo ei siti contaminati apat

- incubare a 20 ± 2 °C, con illuminazione di circa 4.000 lux, fotoperiodo di
16 ore di luce – 8 di buio e mantenere in agitazione mediante
insufflazione di aria per circa 7 giorni;
- separare la biomassa algale dai residui del mezzo colturale mediante
centrifugazione (circa 3.000 gpm per 5-10 minuti), scartare il surnatante
e risospendere le alghe in acqua di allevamento con durezza ridotta a 30
÷ 50 mg/L di CaCO3 (ottenuta per miscelazione con acqua bidistillata o
ultrapura);
- effettuare una seconda centrifugazione, scartare il surnatante e
raccogliere il sedimento algale risospendendo con acqua a durezza
ridotta a 30 ÷ 50 mg/L di CaCO3 in modo da ottenere una densità
dell’ordine di 10 7 ÷ 10 8 cellule/mL;
- verificare la densità cellulare mediante conteggio alla camera di Bürker o
con contatore automatico di particelle;
- conservare la sospensione algale al buio a 4 ± 3°C per un mese.
Sospensione di lievito
Il lievito Saccharomyces cerevisiae, reperibile in confezioni commercializzate
per la panificazione, viene risospeso in acqua di durezza ridotta in modo da
ottenere una densità dell’ordine di 10 7 ÷ 10 8 cellule/mL.
La densità cellulare è verificata mediante conteggio alla camera di Bürker o
contatore automatico di particelle.
Conservare la sospensione di lievito al buio a 4 ± 3°C per un mese.
Verifica idoneità dell’allevamento di Daphnia magna
Tale verifica prevede l’esecuzione di due prove: il controllo dell’idoneità del
mezzo di allevamento ed il controllo dell’effetto tossico con dicromato di
potassio; effettuare con cadenza semestrale.
Verifica idoneità del mezzo di allevamento
- Introdurre 10 dafnidi di età inferiore alle 24 ore in 500 mL di acqua di
allevamento;
- operare secondo le condizioni previste per l’allevamento (temperatura,
illuminazione, alimentazione, aerazione e sostituzione del mezzo
bisettimanale).
- prolungare il saggio per un periodo corrispondente a 3 schiuse (da 14 a
21 gg).;
- separare giornalmente i neonati e contarli;
- Il numero medio complessivo dei neonati per femmina al termine del
saggio deve essere superiore a 20 e prossimo a 60;
- la mortalità relativa alle 10 dafnie utilizzate all’inizio del saggio non deve
essere superiore al 20%.
Controllo dell’effetto tossico con bicromato di potassio
- Determinare la EC50 24 h del dicromato di potassio utilizzando l’acqua
di diluizione per verificare la sensibilità di Daphnia magna, (esempio di
concentrazioni da utilizzare: 3,2 mg/L; 2,7 mg/L; 2,3 mg/L; 1,6 mg/L; 1,0
mg/L; 0,4 mg/L);
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