produção de micropartículas e nanopartículas poliméricas ... - UFRJ

Metodologia experimental
Teste microbiológico
A técnica seguida foi o “Método da difusão em ágar – técnica do disco”, que tem
como fundamento medir um halo de inibição de crescimento em uma placa contendo
um microrganismo. Este halo de inibição observado é proporcional à difusão e à
concentração de um determinado antibiótico para o meio de cultura. Os procedimentos
experimentais descritos a seguir foram baseados na metodologia descrita por
OLIVEIRA (2005) [200] , com algumas pequenas modificações experimentais.
1. Preparo dos discos de papel absorvente
a. Foram utilizados discos de papel secos, esterilizados e sem antibióticos de
aproximadamente 6 mm de diâmetro (DME – Araçatuba, SP).
b. Cada disco foi impregnado com 15 µL de “solução teste” em câmara de fluxo laminar.
2. Preparo das placas
a. Prepararam-se antecipadamente placas contendo ágar Mueller-Hinton 15 e também
caldos Mueller-Hinton.
b. Dois microorganismos foram reativados em placas contendo ágar nutriente (24 h a
35ºC) e inoculados nos caldos Muller-Hinton para promover seu crescimento (48 h a
35ºC).
c. Utilizando um swab (haste de plástico com algodão nas pontas) esterilizado, distribuiu-
se o inóculo microbiano sobre a superfície do ágar.
d. Com um pinça estéril, distribuíram-se os discos (que foram previamente impregnados)
sobre a superfície do ágar.
e. Incubaram-se as placas contendo os discos em estufa a 35ºC por um período de 16-18 h.
Após esse período, fizeram-se as leituras das placas, para verificar os halos de inibição
de crescimento formado.
15 Ágar Mueller-Hinton – meio de cultura usado para testes de sensibilidade de microorganismos à antibióticos. Sua composição
aproximada consiste de extrato de carne (2 g/L), caseína hidrolisada (17,5 g/L), amido (1,5 g/L) e ágar (17 g/L).
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