produção de micropartículas e nanopartículas poliméricas ... - UFRJ

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Metodologia experimental Teste microbiológico A técnica seguida foi o “Método da difusão em ágar – técnica do disco”, que tem como fundamento medir um halo de inibição de crescimento em uma placa contendo um microrganismo. Este halo de inibição observado é proporcional à difusão e à concentração de um determinado antibiótico para o meio de cultura. Os procedimentos experimentais descritos a seguir foram baseados na metodologia descrita por OLIVEIRA (2005) [200] , com algumas pequenas modificações experimentais. 1. Preparo dos discos de papel absorvente a. Foram utilizados discos de papel secos, esterilizados e sem antibióticos de aproximadamente 6 mm de diâmetro (DME – Araçatuba, SP). b. Cada disco foi impregnado com 15 µL de “solução teste” em câmara de fluxo laminar. 2. Preparo das placas a. Prepararam-se antecipadamente placas contendo ágar Mueller-Hinton 15 e também caldos Mueller-Hinton. b. Dois microorganismos foram reativados em placas contendo ágar nutriente (24 h a 35ºC) e inoculados nos caldos Muller-Hinton para promover seu crescimento (48 h a 35ºC). c. Utilizando um swab (haste de plástico com algodão nas pontas) esterilizado, distribuiu- se o inóculo microbiano sobre a superfície do ágar. d. Com um pinça estéril, distribuíram-se os discos (que foram previamente impregnados) sobre a superfície do ágar. e. Incubaram-se as placas contendo os discos em estufa a 35ºC por um período de 16-18 h. Após esse período, fizeram-se as leituras das placas, para verificar os halos de inibição de crescimento formado. 15 Ágar Mueller-Hinton – meio de cultura usado para testes de sensibilidade de microorganismos à antibióticos. Sua composição aproximada consiste de extrato de carne (2 g/L), caseína hidrolisada (17,5 g/L), amido (1,5 g/L) e ágar (17 g/L). 239
A Tabela A1 resume os resultados obtidos para os extratos aquosos das amostras testadas neste teste microbiológico. Os extratos poliméricos foram obtidos conforme descrito no teste de liberação do fármaco, exceto pela proporção polimero/solução extratora. Em cada placa de teste colocaram-se seis discos com os extratos já impregnados: um disco para o branco, um disco para cada concentração de amoxicilina testada, um disco para o extrato da amostra e mais um disco contendo uma concentração determinada de amoxicilina (10 µg/disco – DME, Araçatuba, SP). Tabela A1 – Extratos aquosos usados no teste microbiológico. Extrato Aquoso Característica Amoxicilina (µg/µL )* Solução Extratora Branco 0 Amox 1 Controle positivo 0,33 Amox 2 Controle positivo 0,66 Amox 3 Controle positivo 1,33 PVAc-co-PMMA Amostra 0 PVA/PVAc-co-PMMA Amostra 0 PVAc-co-PMMA 1% (org) Amostra 0 PVA/PVAc-co-PMMA 1% (org) Amostra 0,25 PVAc-co-PMMA 1% (aquo) Amostra 0,60 PVA/PVAc-co-PMMA 1% (aquo) Amostra 0 Amox = amoxicilina; PVAc = poli(acetato de vinila); PMMA = poli(metacrilato de metila); PVA = poli(álcool vinílico). * Concentração estimada Os testes foram realizados em duplicata, utilizando-se dois conjuntos de placas. Em um primeiro conjunto, o microorganismo que foi inoculado foi a Escherichia coli DH5alfa (ATCC 53868), que é sensível à amoxicilina, o que faz deste microorganismo o controle positivo do ensaio. Em um outro conjunto de placas, o microorganismo que foi inoculado foi a Pseudomonas aeruginosa PAO1, que é resistente à amoxicilina, sendo este o controle negativo. Os tamanhos dos halos observados nas placas foram determinados com o auxílio de uma régua. 240
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PRODUÇÃO DE MICROPARTÍCULAS E NA
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Oliveira, Marco Antonio Monteiro de
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Síntese de nanogel biodegradável
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Penicilina Observada pela primeira
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