Kaser EG: Genotyp-Phänotyp-Korrelation beim leichten hereditären ...

31
wird als Durchschnittszeit an 20 Normalpatienten vom durchführenden Labor selbst
ermittelt.
In unserer Arbeit wurde das venöse Blut durch fertige Abnahmesysteme (geschlossenes
Blutentnahmesystem Sarstedt-Monovette ® ) direkt mit Citratlösung (0,11 mol/l) im
Verhältnis 1/9 versetzt. Das so antikoagulierte Blut wurde anschließend 5 Minuten bei
2000 U/min (944 g) zentrifugiert und das Plasma abpipettiert. Das gewonnene Plasma
wurde erneut bei 4500 U/min (4777 g) 15 Minuten zentrifugiert und konnte so
anschließend nahezu plättchenfrei abpipettiert werden.
Der Inhalt des Fläschchens Thromborel ® S wurde mit 10 ml Aquadest aufgelöst und für
45 Minuten bei 37° C inkubiert und durch vorsichtig es Schwenken gemischt.
50 µl des Probenplasmas wurden im Analysator mit 100 µl Thromborel ® S (aus humaner
Plazenta gewonnenes Thromboplastin und Calcium-Chlorid, ISI-Wert 1,0−1,1) automatisch
gemischt und so wurde die Gerinnungsaktivierung in vitro gestartet. Der
chargenabhängige ISI-Wert und die im Labor ermittelte MNPT wurden zuvor im BCS ®
XP-System ins Software-Menü eingetragen, wodurch die Berechnung der INR
automatisch ermöglicht wurde.
2.3.1.2 Einzelfaktor-VII-Bestimmung
Die Aktivität der Gerinnungsfaktoren wird durch den sogenannten Einphasentest
(Reaktionsablauf von der Initiation bis zur Fibrinbildung) bestimmt. Für den FVII (und für
FII, V und X) stellt er eine Variation der TPZ (Quick) dar. Zur Aktivitätsmessung der
einzelnen Faktoren wird der Test so eingestellt, dass nur der zu untersuchende Faktor
die Reaktionsgeschwindigkeit bestimmt (Thomas, 1988). Das gelingt dadurch, dass dem
Probenplasma ein Mangelplasma zugesetzt wird, das alle Gerinnungskomponenten des
Tests im Überfluss enthält, bis auf den zu bestimmenden Faktor. Die Reaktion wird
anschließend durch Zugabe des Thromboplastins analog zur TPZ gestartet, die
ermittelte Zeit mit einer zuvor erstellten Kalibrationskurve verglichen und die FVII-
Aktivität in Prozent der Norm (60−120 %) abgelesen.
Das verwendete Thromboplastin kann den funktionellen Test erheblich beeinflussen
(Perry, 2002; Poggio et al., 1991) und zeigt eine deutliche Diskrepanz zwischen
tierischem und humanem Ursprung. Um die Aussagefähigkeit des In-vitro-Tests zu
sichern, sollten daher humane Reagenzien eingesetzt werden (McVey et al., 2001). Die