Kaser EG: Genotyp-Phänotyp-Korrelation beim leichten hereditären ...

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Desoxyribose verknüpft. Der Nukleotidstrang entsteht durch die Veresterung einer
energiereichen Triphosphatgruppe an der C 3 - bzw. C 5 -OH-Gruppe der Pentose. Nach
ihrer Syntheserichtung erhält dadurch eine DNA-Sequenz definitionsgemäß ein 5’- und
3’-Ende. Die Abfolge der vier Nukleotide bildet den genetischen Code, wobei jeweils drei
Nukleotide eine Aminosäure kodieren. 64 möglichen Kodierungscodes stehen
insgesamt 21 verschiedene Aminosäuren gegenüber, sodass Mehrfachkodierungen die
Regel sind.
Die „Polymerase Chain Reaction“ (PCR) ist eine Methode, um gewonnene isolierte DNA
in vitro zu vervielfältigen und sie weiteren genetischen Analysen zuzuführen. Hierzu wird
die „DNA-Polymerase“ benötigt, ein Enzym, welches in allen Organismen vorkommt und
für die Verdopplung der DNA vor der Zellteilung verantwortlich ist. Die neu gebildete
DNA dient in vitro als zusätzliche Matrize und induziert so in den folgenden
Syntheseschritten die gewünschte exponentielle Kettenreaktion. Nur bekannte DNA-
Sequenzen sind diesem Verfahren zugänglich, da zum Start der Reaktion kurze
komplementäre Nukleotidsequenzen („primer“) benötigt werden. Zunächst wird der
helikale Doppelstrang thermisch bei 96° C in seine Einzelstränge denaturiert („melting“).
Jetzt können zugesetzter Forward- und Reverse-Primer an je einem der beiden
Doppelstränge bei spezifischer Temperatur hybridisieren („annealing“) und mit ihrem 3’-
Ende die zu amplifizierende Sequenz (Template) umschließen. In zwei Zyklen wird die
Template-Sequenz bei 72°C nach Inkubation mit der D NA-Polymerase und den vier
energiereichen Desoxyribonukleotiden (dNTP) exponentiell amplifiziert („elongation“).
Ein Zyklus dauert ca. ein bis zwei Minuten, sodass nach ein bis zwei Stunden und ca. 35
Zyklen ausreichend DNA-Material zur Verfügung steht. Die PCR wird durch Abnahme
der relativen Enzymkonzentration bzw. Verbrauch der dNTP limitiert (Mullis el al., 1986;
Murken et al., 2003; Saiki et al., 1988). Verwendung fanden bei der FVII-Genanalyse
Primer mit einer Länge von bis zu 22 Nukleotiden (siehe Tab. 7).