Kaser EG: Genotyp-Phänotyp-Korrelation beim leichten hereditären ...

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Domaine Primer
P F CCTGGTCTGGAGGCTCTC
P R GGGGAGGACACAGGTGT
E 1aF CTCAGCTGGGGTGTTCAGAG
E 1aR TGGATGCTGGTTTCTAGAAGGA
E 1bF GTGGCGTGAGGATGGCTAGT
E 1bR CTGGAGCGGTCACTTCCTCT
E 2F GGCGGTCTCCGAGGCACTGG
E 2R GCGCCGCTGCGTGTTCGCCG
E 3F CCAGTTCATGGTGTGTCCAG
E 3R TACACACCCCACCAGGTTGT
E 4F CCAGTTCATGGTGTGTCCAG
E 4R TACACACCCCACCAGGTTGT
E 5F AGCTCATGCCACCTTCCAGGC
E 5R TGTCATCTGGGACTGGGACATG
E 6F CTAGTGGCACGTTCATCCCT
E 6R TTCAAAAGGCTTCAAGACCC
E 7F ATGACAGCAATGTGACTTCC
E 7R GTCTGTGGAAGTGACAGCAC
E 8.1F GTGAGGTGGCAGGTGGTGGA
E 8.1R CCTTGCTGCCATCCGAGTAG
E 8.2F GCACCACCAACCACGACATC
E 8.2R TGCCCTCCTCTACCCCATTA
Tab. 7: Primer
Verwendete Primer bei der FVII-Genanalyse.
R: reverse; F: forward; P: Promoter; E: Exon
2.4.1.3 DNA-Sequenzierung
Die Analyse der einzelnen Basen einer DNA-Sequenz erfolgt durch veränderte dNTPs
ohne eine 3’-OH-Gruppe. Neben den normalen Nukleotiden mit den Basen Adenin,
Thymin, Guanin und Cytosin wird in vier verschiedenen PCR-Reaktionsansätzen jeweils
ein verändertes Didesoxyribonukleotid (ddNTP) zugesetzt. Durch Einbindung einer
komplementären ddNTP kommt es zum Syntheseabbruch des Nukleotidstrangs, da eine
Veresterung der Phospatgruppe an der fehlenden 3’-OH-Gruppe nicht mehr möglich ist.
Die zuvor mit verschiedenen Fluoreszenzfarbstoffen markierten ddNTPs liegen
endständig an unterschiedlich langen Strängen, die durch die anschließende
Gelelektrophorese differenziert werden können (Murken et al., 2003).
2.4.1.4 Gelelektrophorese
DNA-Fragmente werden nach ihrer Länge mithilfe der Gelelektrophorese aufgetrennt. In