Pharmakologie der ADP-Rezeptoren auf humanen Thrombozyten

Rezeptordichte (wie z.B. überexprimierte Rezeptoren in heterologen Systemen) durchaus in der
Lage ist, Kalzium-Freisetzung vergleichbar dem ADP zu bewirken.
Eine Überprüfung dieser These könnte mittels unterschiedlich exprimierender stabilen Zelllinien
versucht werden: Zwischen massiv überexprimierenden Linien (evtl. auch transient exprimierenden
Zellen) und nur auf niedrigem Niveau exprimierenden Zellen sollte so ein Unterschied im
Antwortverhalten auf ATP messbar sein.
Weiter erschwert wird die genaue Ermittlung des pharmakologischen Profils des P2Y1 durch die
Beobachtung, daß auch Rezeptoren der P2Y-Klasse, und zwar insbesondere der P2Y1,
Heterooligomere mit Adenosinrezeptoren bilden können. Diese zeigen dann ein eigenes, neues
pharmakologisches Profil (166). Auch dies kann nun mittels transienter oder stabiler Ko-Expression
solcher Rezeptoren in den P2Y1-Zellinine systematisch untersucht werden.
5.10.3 Erste Versuche zur Regulation der Rezeptoren
Aus Thrombozyten ist seit längerem bekannt, daß Stimulation sowohl der A-Kinase als auch der G-
Kinase zu einer Hemmung der Kalzium-Freisetzung in den Plättchen führt (50-52). Die stabilen
Zelllinien bieten ein ideales System, eine mögliche Beeinflussung der P2Y1-vermittelten Kalzium-
Freisetzung genauer zu charakterisieren.
Als Voraussetzung müssen jedoch zunächst ein Stimulationsweg bzw. die entsprechenden Kinasen
vorhanden sein.
Die Expression von PG-E1-Rezeptoren und eine tatsächliche Aktivierung der Adenylylcyclase
konnte durch eine Erhöhung der cAMP-Spiegel nach PG-E1 Zugabe gezeigt werden (J. Brich,
Daten nicht gezeigt), die Expression der A-Kinase konnte durch Zunahme der VASP-
Phosphorylierung nach PG-E1-Stimulation in 1321N1-Zellen mittels Western Blot nachgewiesen
werden (P. Hoenig-Liedl, J. Geiger, nicht publiziert).
Trotz vorhandenem Signalweg konnte durch Stimulation mit PG-E1 die Kalzium-Mobilisation durch
P2Y1 in 1321N1-Zellen nicht wie in Thrombozyten vollständig verhindert werden. Allerdings konnte
eine leichte Tendenz hin zu niedrigeren Signalen festgestellt werden. Zur genaueren Auswertung
müßten aber noch eine größe Zahl an Messungen als in der hier vorliegenden Arbeit durchgeführt
werden, evtl. auch mit unterschiedlichen PG-E1-Konzentrationen.
Bei der G-Kinase stellt sich die Sitation anders da: Da die sie nicht ubiquitär exprimiert ist, aber ein
viraler Vektor zur Verfügung stand, wurden die Zelllinien damit infiziert, was zu einer Expression der
G-Kinase in praktisch 100% der Zellen führte. Damit kann also davon ausgegangen werden, daß in
praktisch allen Zellen nach Stimulation mit dem direkten Aktivator 8-pCPT-cGMP eine aktivierte G-
Kinase vorlag.
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