Pharmakologie der ADP-Rezeptoren auf humanen Thrombozyten

4.10.5 Versuche zur Regulation des P2Y1-Rezeptors in Astrozytoma 1321N1 Zellen
4.10.5.1 Versuche zu einer möglichen Regulation des P2Y1 Rezeptors durch eine Aktivierung
der cGMP-abhängigen Proteinkinase (G-Kinase)
Aus Experimenten mit Thrombozyten ist bekannt, daß nach Zugabe von Stickstoffmonoxid (NO) via
Stimulation der Guanylylcyclase und konsekutiver Erhöhung der cGMP-Spiegel - vermutlich über
eine Phosphorylierung durch die G-Kinase - eine Inhibierung der Kalzium-Freisetzung auftritt. Der
genaue Mechanismus ist ungeklärt. Daher stellt ein System, in dem der Rezeptor einer
Untersuchung besser zugänglich ist als in den in ihrer Lebenszeit sehr begrenzten Thrombozyten,
eine ausgezeichnete Möglichkeit zur genaueren Charakterisierung der intrazellulären Signalwege
dar.
Da ein die G-Kinase enthaltender viraler Vektor zur Verfügung stand, wurde auf eine Bestimmung
der endogenen G-Kinase verzichtet (146).
Ebenfalls zur Verfügung stand ein viraler Vektor, der eine nicht funktionsfähige G-Kinase exprimiert.
Dieser diente als Kontrolle für eventuell auftretenden Artefakte durch die virale Infektion der Zellen
(146).
Die Effektivität der viralen Transfektion wurde mittels Immunfluoreszenz direkt von den in den
Messungen verwendeten Glasplättchen überprüft und lag bei fast 100%, so daß davon
ausgegangen werden kann, daß alle vermessenen Zellen auch die G-Kinase exprimierten.
Als direkter Aktivator der G-Kinase wurde 8-(p-Chlorophenylthio)-cGMP (8-pCPT-cGMP) eingesetzt
(15).
81