Pharmakologie der ADP-Rezeptoren auf humanen Thrombozyten

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Abb. 27: Western-Blot mit den unterschiedlichen P2X1-
Konstrukten exprimiert in COS-7 Zellen.
Spur 1-3: inkubiert mit dem anti-Flag-M2-Antikörper: Spur 1:
COS-7 Zellen-Lysat, transfeziert mit dem Leer-Vektor
pCMV-Tag1, Spur 2: COS-7 Zellen-Lysat, die das P2X1-N-
Flag Plasmid exprimieren, Spur 3: COS-7 Zellen-Lysat, die
das P2X1-N-Flag/C-c-myc Plasmid exprimieren,Spur 4:
Proteinstandard, Spur 5/6 inkubiert mit anti-c-myc-
Antikörper: Spur 5: COS-7 Zellen-Lysat, die das P2X1-N-
Flag/C-c-myc Plasmid exprimieren, Spur 6: COS-7 Zellen-
Lysat, transfeziert mit dem Leer-Vektor p-CMV-Tag 1.
Neben den leider vielen Hintergrundsbanden mit dem Anit-Flag-M2-Antikörper tritt in den Spuren 2
und 3 im Vergleich mit den nicht exprimierenden Zellen in der Spur 1 im Bereich von 60 kD jeweils
eine dicke Bande auf. Die Größe dieser Bande enspricht dem theoretisch kalkulierten Wert für den
P2X1 Rezeptor.
Da aber auch im Falle des P2X1 keine veröffentlichten Daten zur molekularen Größe vorlagen,
wurde zur Sicherheit auch der Nachweis des doppelt-getaggten Rezeptors P2X1-N-Flag/C-c-myc
mit derselben Probe und dem Antikörper Anti-c-myc durchgeführt. Dabei ergab sich das erwartete
Bild einer identisch laufenden Bande (Spur 5).
4.9.3 Nachweis der Expression mittels Immunfloureszenz
Als zuverlässige und einfache Methode hat die Immunfluoreszenz zusätzlich zum bloßen
Expressionsnachweis mittels Western-Blot den Vorteil, daß – zumindest in einem bestimmten
Umfang – auch Aussagen über das zelluläres und subzelluläres Verteilungsmuster getroffen
werden können.
4.9.3.1 Nachweis von P2Y1
Alle Konstrukte wurden transient in COS7 und 1321N1 Zelllinien exprimiert, wobei sich unabhängig
vom Zelltyp folgende Unterschiede im Expressionsmuster zeigten:
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